胰島素對小鼠MIN6細胞FoxO1細胞核-細胞質(zhì)穿梭定位的影響.pdf

1、FoxO1是胰島β細胞的轉(zhuǎn)錄因子之一，在細胞內(nèi)參與多種信號轉(zhuǎn)導通路，能夠調(diào)節(jié)細胞分化、增殖和凋亡，對胰島β細胞的功能具有重要影響。
　　FoxO1-EGFP實時成像研究顯示，在小鼠胰島β細胞或MIN6細胞，用3mmol/L葡萄糖孵育時，F(xiàn)oxO1一直在細胞核顯著分布。當分別以16.7mmol/L、30mmol/L葡萄糖或116.16ng/mL、1161.6ng/mL胰島素孵育細胞10-20min時，可檢測到胞質(zhì)熒光增多而細胞核熒光

2、減少。
　　另有研究表明，用25mmol/L葡萄糖刺激MIN6細胞和小鼠胰島β細胞30min時 FoxO1發(fā)生急劇磷酸化并且由細胞核轉(zhuǎn)位至細胞質(zhì)，這一效應具有時間（0.5-2h）和劑量（2.5-20mmol/L）依賴性。而分別以0.58ng/mL、5.80ng/mL、580ng/mL和1161.6ng/mL胰島素刺激MIN6細胞和小鼠胰島β細胞同樣能夠觀察到FoxO1發(fā)生磷酸化改變，但卻未對FoxO1的胞質(zhì)-胞核轉(zhuǎn)位進行觀察。

3、r>　　為探討胰島素對FoxO1表達部位的影響，本實驗擬通過給予不同濃度胰島素孵育小鼠MIN6細胞，觀察不同濃度胰島素在不同時間對β細胞FoxO1細胞核-細胞質(zhì)穿梭定位的影響。
　　目的：
　　采用激光掃描共聚焦顯微鏡對 MIN6細胞胰島素作用后免疫化學染色觀察FoxO1在不同濃度刺激不同時間后表達位置的變化。
　　方法：
　　1．小鼠胰島素瘤MIN6細胞用DMEM（high glucose)培養(yǎng)基（含有25mm

4、ol/L葡萄糖、15％FBS、100U/mL青霉素、100μg/mL鏈霉素）于25ml培養(yǎng)瓶放置在37℃、5%CO2濃度的細胞孵箱中培養(yǎng)。
　　2．分別以含25mmol/L和5.5mmol/L葡萄糖培養(yǎng)基孵育12小時并檢測培養(yǎng)上清液胰島素濃度。
　　3．在含5.5mmol/L葡萄糖培養(yǎng)基基礎上給予50μIU/mL（1.75ng/mL）、100μIU/mL(3.5ng/mL)和150μIU/mL(5.25ng/mL)濃度胰島素

5、分別作用12、24和48小時。
　　4．細胞免疫化學染色結(jié)合激光掃描共聚焦顯微鏡觀察FoxO1的細胞內(nèi)定位。
　　結(jié)果：
　　1．25mmol/L葡萄糖培養(yǎng)MIN6細胞12小時胰島素分泌濃度為74.37ng/mL，F(xiàn)oxO1主要在細胞質(zhì)表達；5.5mmol/L葡萄糖培養(yǎng)MIN6細胞12小時胰島素分泌濃度為37.46ng/mL，F(xiàn)oxO1主要在細胞核表達。
　　2．與對照組相比，胰島素濃度50μIU/mL組分別在刺

6、激12、24、48小時后FoxO1熒光強度的胞質(zhì)/胞核比增加，12小時組差異不具有統(tǒng)計學意義（P=0.084），24小時和48小時組存在統(tǒng)計學差異（P<0.05）；胰島素濃度100μIU/mL組分別在刺激12、24和48小時后 FoxO1熒光強度胞質(zhì)/胞核比增加，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；胰島素濃度150μIU/mL組分別在刺激12、24和48小時后FoxO1熒光強度胞質(zhì)/胞核比增加，均存在統(tǒng)計學差異（P<0.05）。50μI