慢性HCV基因1b型感染者CTL抗原表位的變異對治療轉歸的影響.pdf

1、目的：本研究旨在探討經標準PEG-IFN-α聯(lián)合利巴韋林抗病毒治療的丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus，HCv)基因1b型患者體內CTL表位的變異情況及其與治療轉歸的關系，尋找保守的CTL表位，為今后HCV表位疫苗研究提供依據。
　　方法：病例來源于“十一五”重大專項丙型肝炎數據庫，根據治療應答情況，將基因1b型HCV慢性感染者分為無應答(Non-response，NR)組與快速應答(Rapidviral respo

2、nse，RVR)組，再根據NR患者治療前后分為NR0周(Week，W)與NR12W。從兩組中各選取9例年齡、性別、初始病毒載量等相匹配的患者，所有患者均接受標準PEG-IFN-α(180μg/W)聯(lián)合利巴韋林(15 mg·kg-1·d-1)抗病毒治療，提取NR0W、12W及RVR0W的27份血清中的RNA，利用巢式RT-PCR擴增HCV RNA全長序列并進行克隆測序。經文獻檢索及生物信息軟件預測，篩選了11個與CTL有較高敏感性與特異性

3、的抗原表位。分析野牛型(Wide type，WT)與突變型(Mutant type，MT)表位在NR0w和12W以及RVR0W準種中的差異，以及分析這些表位在中國常見基因型中的序列保守性及保守表位側翼序列的變異。
　　結果：27份血清樣品中有16份血清樣品已擴增出接近HCV編碼區(qū)全長的序列，其余11份樣品除了NS5A及NS5B部分區(qū)域外其他區(qū)域均已獲得18-24個克隆測序的結果。文獻檢索及預測的11個CTL抗原表位均在已擴增出的序

4、列范圍內。
　　1.組間比較：NR患者治療前后優(yōu)勢表位大多無變化，RVR0W與NR0W及12W相比，多數WT表位在RVR0W出現頻率高于NR0W及12W。
　　2.組內比較：NR0W、12W與RVR0W優(yōu)勢表位多為野生型，NR組優(yōu)勢表位為MT變異的為第1位氨基酸(Amino acid，AA)變異或第2位常見錨定AA之間的替換。
　　3.突變位點分析：第2、9位錨定AA殘基位點的變異多為常見錨定AA之間的替換，常見變異包

5、括L2M、L2I、I2V、V9I、I9M、I9V。第3、4位AA殘基位點的變異多出現在NR0W及12W，RVR組很少出個位點的變異。第1、8位AA變異多見于NR患者中。第5、6、7位AA殘基較少發(fā)生變異。
　　4.側翼序列分析：E1-363、NS4B-1764表位側翼序列未發(fā)現非同義突變。NS3-1073氨基端(Amino，N)和羧基端(Carboxy，C)側翼均有非同義突變，NR8患者0W時該表位C端側翼存在Y1082F突變的準

6、種為非優(yōu)勢準種，12W時變?yōu)閮?yōu)勢準種。E2-723與NS3-1411的N側翼及NS5B-2594的C端2605位出現非同義突變。
　　5.基因型1b、2a、6a間比較：各基因型間優(yōu)勢表位變異情況不一致，與WT表位相同或僅一個非錨定AA殘基位點變異的表位包括：WT E2-607、WT E2-723、WT NS3-1411和WT NS4B-1764。E1-363、E2-716、NS3-1703、NS5B-2594在各基因型間相對保守，

7、優(yōu)勢表位涉及2-3個非錨定AA殘基的改變。NS2-834、NS2-838、NS3-1406在基因型1b內有9種以上表型，且基因型間也未發(fā)現完全相同的表型。
　　結論：1.RVR患者體內優(yōu)勢表位多為野生型，發(fā)生突變的表位在RVR0W的所有準種中不占優(yōu)勢。NR患者在治療前后優(yōu)勢表位大多無變化；逃避CTL免疫反應的突變可能在治療前就已經存在。
　　2.發(fā)生在錨定AA殘基位點的變異多為常見錨定AA殘基之間的替換，如E2-607 L2

8、I、E2-723 V9I。發(fā)生在第3、4為AA殘基位點的變異在NR組與RVR組有顯著差異，抗原表位發(fā)生免疫逃逸可能主要與TCR識別有關。發(fā)生在第1、8位的AA變異常是引起NR0W及12W優(yōu)勢表位由WT變?yōu)镸T的突變。
　　3.NR8患者對抗病毒治療無應答除與多個表位發(fā)生突變有關外，可能與C端側翼1082位AA由Y突變?yōu)镕影響蛋白酶處理加工抗原表位有關。
　　4.篩選的11個CTL抗原表位除NS2-834、NS2-838及NS