規(guī)?；N雞場胚胎疾病病原學(xué)研究及禽波氏桿菌16SrRNA基因序列分析.pdf

1、禽類胚胎性疾病是一類由多病原引起的綜合性疾病，可造成禽胚發(fā)育受阻，胚胎死亡，孵化率降低等現(xiàn)象，導(dǎo)致養(yǎng)禽業(yè)的重大經(jīng)濟(jì)損失。2004年6月份以來，山東某一大型AA父母代肉種雞場(飼養(yǎng)120萬套肉種雞，共分12個(gè)分場)第2、3、5分場的種雞群所產(chǎn)種蛋明顯的出現(xiàn)胚胎死亡、孵化率降低、弱雛增多，雛雞出現(xiàn)呼吸道癥狀，飼養(yǎng)到30d左右時(shí)，大腸桿菌及新城疫病毒等的感染率明顯升高，雞只生長發(fā)育遲緩等現(xiàn)象，其他分場未出現(xiàn)類似情況，由此推測該病與種雞群有關(guān)。

2、為了進(jìn)一步探討引起該規(guī)模化種雞場胚胎性疾病的原因，本研究通過流行病學(xué)調(diào)查及病原學(xué)檢查，并對(duì)其主要病原進(jìn)行PCR檢測，為規(guī)?；N雞場胚胎性疾病的防治提供理論依據(jù)。 本研究共分3部分： 一、規(guī)?；N雞場胚胎性疾病病原學(xué)研究 2004年6月份以來，山東某一大型AA父母代肉種雞場孵化場出現(xiàn)胚胎死亡、弱雛增多，孵出的雛雞30d左右出現(xiàn)免疫應(yīng)答不良、生長緩慢等癥狀。通過對(duì)該大型AA父母代肉種雞場第2、3、5分場產(chǎn)蛋雞及其所產(chǎn)

3、種蛋孵出的1d商品雛雞、30～40d商品雞的血清抗體檢測，雞傳染性貧血病病毒(CIAV)、病毒性關(guān)節(jié)炎病毒(VAV)平均陽性率分別為4.67％、3.00％，雞白痢、雞敗血支原體、滑液囊支原體、雞大腸桿菌和禽波氏桿菌平均陽性率分別為13.59％、12.69％、8.10％、19.62％、37.14％；從死亡雞胚、肉仔雞弱雛和死雛、商品育成雞等內(nèi)臟器官進(jìn)行病原學(xué)檢查，結(jié)果主要分離到禽波氏桿菌(62.60％)、大腸桿菌(51.50％)、沙門氏菌

4、(26.30％)和支原體(26.67％)四種病原菌及CIAV、VAV兩種病毒。結(jié)果表明造成該病的主要原因是由禽波氏桿菌、沙門氏菌、大腸桿菌、支原體及CIAV、VAV共感染種雞后，由種蛋垂直傳播到雞胚、雛雞造成的。 二、主要免疫抑制病病原的分子生物學(xué)調(diào)查 當(dāng)雞群中存在免疫抑制性病毒的感染時(shí)，雞群將對(duì)其它病毒或細(xì)菌變得易感，且感染的癥狀、病變不典型，并造成免疫失敗。本研究通過流行病學(xué)調(diào)查與病原學(xué)檢查，發(fā)現(xiàn)該場存在蛋傳遞性免疫

5、抑制性病毒(雞傳染性貧血病病毒、病毒性關(guān)節(jié)炎病毒)的感染。為了解該場是否存在蛋傳遞性病毒與其他免疫抑制性傳染因子的多重感染，本研究將采取的肉仔雞弱雛和死雛、商品育成雞等的臟器(胸腺、脾、法氏囊、關(guān)節(jié)液及骨髓等)，分別按常規(guī)方法提取組織DNA與RNA，通過四重PCR方法檢測CIAV、MDV、REV、ALV，通過RT-PCR方法檢測IBDV和VAV，結(jié)果僅檢測到CIAV和VAV的存在，陽性率分別為7.34％和5.02％，這一結(jié)果顯示,CIA

6、V和VAV感染是導(dǎo)致該雞場發(fā)生免疫抑制的主要病因之一。 三、禽波氏桿菌16SrRNA基因序列分析 病原學(xué)研究結(jié)果表明禽波氏桿菌是影響該大型AA父母代肉種雞雞胚胎性疾病的主要病因之一(分離率為62.60％)，為進(jìn)一步研究其分子生物學(xué)特性，本實(shí)驗(yàn)建立了禽波氏桿菌的16SrRNA序列分析鑒定方法。通過PCR反應(yīng)對(duì)本實(shí)驗(yàn)分離到的禽波氏桿菌以及本實(shí)驗(yàn)室分離保存的9株禽波氏桿菌、3株兔支氣管敗血波氏桿菌及1株豬支氣管敗血波氏桿菌菌株

7、，擴(kuò)增其16SrRNA基因的5’端片段(783bp)，并測定所得片段的DNA序列。用DNAStar分析軟件將所獲得的序列與GenBank中的禽波氏桿菌序列進(jìn)行比較，由此構(gòu)建禽波氏桿菌菌株的系統(tǒng)發(fā)育樹。結(jié)果，本實(shí)驗(yàn)分離到的禽波氏桿菌與9株已分離保存的禽波氏桿菌核苷酸序列同源性為99.5％～99.9％，該10株禽波氏桿菌核苷酸序列與GenBank中收錄的AF177666株禽波氏桿菌核苷酸序列同源性為82.0％～82.5％，與兔支氣管敗血波氏