HAUSP-NANOG調(diào)控網(wǎng)絡在腦膠質(zhì)瘤中的生物學作用.pdf

1、目的:檢測HAUSP在不同病理級別膠質(zhì)瘤組織和U87膠質(zhì)瘤細胞系中的表達,初步研究HAUSP與NANOG及膠質(zhì)瘤細胞分化狀態(tài)的關(guān)系,HAUSP與NANOG在膠質(zhì)瘤細胞中的亞細胞定位,探討HAUSP-NANOG調(diào)控網(wǎng)絡在膠質(zhì)瘤生物學行為中的作用。為后續(xù)進一步體內(nèi)外研究HAUSP-NANOG調(diào)控網(wǎng)絡對膠質(zhì)瘤細胞生物學活性的影響奠定基礎(chǔ)。
　　方法:(1)采用免疫組織化學染色法、Westernblot和Realtime-PCR方法從蛋白

2、和mRNA水平檢測70例不同病理級別膠質(zhì)瘤組織和10例正常腦組織標本中HAUSP的表達。(2)免疫組織化學染色檢測HAUSP、CD133在不同級別膠質(zhì)瘤中的表達,血清剝奪法從U87膠質(zhì)瘤細胞株分離培養(yǎng)BTSCs,通過全反式維甲酸誘導分化,免疫細胞熒光雙重染色觀察HAUSP及CD133在不同時期表達情況。(3)采用免疫組織化學染色SP法檢測HAUSP、NANOG在不同級別膠質(zhì)瘤組織中的表達情況;采用雙重免疫熒光細胞化學染色法檢測在膠質(zhì)瘤細

3、胞U87中HAUSP/NANOG亞細胞定位。
　　結(jié)果:(1)HAUSP蛋白在膠質(zhì)瘤組織WHOⅠ級、Ⅱ級、Ⅲ級和IV級中的差異有統(tǒng)計學意義(F=15.926,P=0.000),HAUSPmRNA的相對含量在膠質(zhì)瘤組織WHOⅠ級、Ⅱ級、Ⅲ級、IV級中的差異有統(tǒng)計學意義(F=57.892,P=0.000),HAUSP蛋白和mRNA表達水平隨著病理級別增高而升高,而在正常腦組織中呈低表達。(2)不同級別膠質(zhì)瘤中HAUSP+細胞、CDl3

4、3+細胞百分比差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05),高級別組膠質(zhì)瘤中HAUSP+細胞、CDl33+細胞表達高于低級別組,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);HAUSP+表達和CDl33+表達呈正相關(guān)關(guān)系(r=0.915,P=0.000);利用無血清懸浮培養(yǎng)法從U87膠質(zhì)瘤細胞系中成功分離培養(yǎng)出BTSCs,具有自我更新與增殖能力,表達特異性干細胞標記物CD133,在SCM中BTSCs發(fā)生貼壁分化,表達神經(jīng)元和星形膠質(zhì)細胞的特異性標記物NSE和

5、GFAP。全反式維甲酸誘導分化,HAUSP、CD133隨著膠質(zhì)瘤干細胞分化表達逐漸減少。(3)HAUSP、NANOG在膠質(zhì)瘤組織中的表達隨著病理級別的增高而增多,兩者呈正相關(guān)性,與膠質(zhì)瘤級別呈正相關(guān),具有統(tǒng)計學意義(P<0.05);在膠質(zhì)瘤細胞U87中,兩者均有表達,且兩者共定位于細胞核。
　　結(jié)論:(1)HAUSP在膠質(zhì)瘤組織中高表達,表達水平隨著病理級別增高而升高,而在正常腦組織中均呈低表達。(2)U87膠質(zhì)瘤細胞系中存在具有