QIC2抑制CBS表達誘導肝癌細胞凋亡的研究.pdf

1、目的：探究胱硫醚-β-合酶（cystathionine-β-synthase,CBS）在肝癌細胞中的作用及QIC2誘導肝癌細胞凋亡的作用及機制。
　　方法：RT-PCR及Western blot方法檢測CBS在肝癌及肝正常細胞中的表達水平；MTT及EdU檢測下調CBS的表達或抑制CBS的活性對肝癌細胞生長增殖的影響；流式細胞儀分析下調CBS的表達對肝癌細胞凋亡的影響；Western blot檢測下調CBS的表達對凋亡相關蛋白及HO

2、-1蛋白表達的影響；通過Western blot及MTT法從化合物QICs(QIC0,QIC1,QIC2和QIC3)中篩選具有抗肝癌活性的CBS抑制劑；應用MTT方法檢測篩選出的QIC2對肝癌SMMC-7721細胞的抗癌活性，以阿霉素和蘇尼替尼為陽性對照；采用EdU實驗檢測QIC2對肝癌SMMC-7721細胞增殖的影響；流式細胞儀分析QIC2對肝癌SMMC-7721細胞周期及細胞凋亡的影響；Western blot方法檢測QIC2對肝癌

3、SMMC-7721細胞中CBS、HO-1以及凋亡相關蛋白表達的影響；DCF法檢測細胞內ROS水平；DTNB法檢測細胞內GSH水平。
　　結果：
　　1、RT-PCR及Western blot結果顯示，與人正常肝細胞比較，在肝癌SMMC-7721及HepG2細胞中CBS mRNA和蛋白水平均呈過表達。
　　2、下調CBS表達或抑制CBS活性可抑制肝癌SMMC-7721細胞的生長和增殖。
　　3、下調CBS表達或抑制

4、CBS活性可誘導肝癌SMMC-7721細胞凋亡，增加凋亡相關蛋白Bax/Bcl-2比值，激活caspase-3級聯反應。
　　4、下調CBS表達可抑制肝癌SMMC-7721細胞中HO-1表達，并增加細胞內的ROS水平。
　　5、QICs類化合物中，QIC2明顯抑制肝癌SMMC-7721細胞中CBS的表達及肝癌SMMC-7721細胞的生長。
　　6、QIC2對肝癌SMMC-7721細胞的抑制活性明顯強于陽性對照蘇尼替尼，

5、但弱于陽性對照阿霉素。
　　7、QIC2可抑制肝癌SMMC-7721細胞增殖。
　　8、QIC2可誘導肝癌SMMC-7721細胞凋亡，激活caspase3級聯反應。
　　9、QIC2可抑制肝癌SMMC-7721細胞中HO-1表達，增加細胞中ROS水平，降低細胞中GSH水平，由此增加細胞的氧化應激。
　　結論：
　　1、CBS可調控肝癌細胞的生長、增殖及凋亡。
　　2、CBS對肝癌細胞凋亡的調控作用可能