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文檔簡介
1、目的:糖皮質(zhì)激素廣泛應用于臨床疾病的治療。長期全身、局部應用糖皮質(zhì)激素可導致激素性白內(nèi)障,其發(fā)病機制尚不明確。目前已證實晶狀體上皮細胞存在糖皮質(zhì)激素受體。糖皮質(zhì)激素作用于人晶狀體上皮細胞后,與其受體結合,其激素受體復合物與相應靶基因的糖皮質(zhì)激素反應元件(GRE)結合后調(diào)控大量靶基因的轉(zhuǎn)錄,進而影響相應靶基因的功能。其中主要涉及細胞膜的轉(zhuǎn)運和細胞骨架結構的改變等。晶狀體通過Na+,K+-ATP酶維持離子進出細胞的平衡,其功能的改變將會引起
2、晶狀體細胞內(nèi)水鈉潴留,形成白內(nèi)障。波形蛋白是重要的細胞骨架蛋白,在晶狀體上皮細胞中適量表達,對于維持晶狀體細胞正常的形態(tài)和功能,具有重要意義。本實驗將應用糖皮質(zhì)激素受體拮抗劑RU486探討糖皮質(zhì)激素受體介導的大鼠激素性白內(nèi)障Na+,K+-ATP酶和波形蛋白的變化,探討糖皮質(zhì)激素受體在激素性白內(nèi)障的發(fā)病中的作用機制。
方法:大鼠透明晶狀體隨機分為對照組、糖皮質(zhì)激素誘導的激素白內(nèi)障組(地塞米松5μM)、糖皮質(zhì)激素受體拮抗劑RU48
3、6組(地塞米松5μM+RU4865μM)。離體晶狀體孵育7天,倒置顯微鏡動態(tài)觀察晶狀體的透明度。HE染色分析三組晶狀體的組織形態(tài)學變化,分光光度計動態(tài)分析Na+,K+-ATP酶的活性,蛋白質(zhì)印跡法和免疫組化法分析Na+,K+-ATP酶α1和波形蛋白的蛋白表達,RT-PCR分析Na+,K+-ATP酶α1和波形蛋白的mRNA表達。
結果:白內(nèi)障組與其它兩組相比,晶狀體在第5天出現(xiàn)霧狀混濁(P<0.05),第7天霧狀混濁更明顯(P<
4、0.01),而對照組和拮抗劑組保持透明。白內(nèi)障組與其它兩組相比,Na+,K+-ATP酶活性隨孵育時間的延長而逐漸下降(P<0.001),而對照組和拮抗劑組無明顯變化。HE染色顯示白內(nèi)障組與對照組和拮抗劑組相比,晶狀體纖維結構排列紊亂,細胞間隙增寬。白內(nèi)障組Na+,K+-ATP酶α1蛋白和mRNA表達下降,而對照組和拮抗劑組表達正常。白內(nèi)障組波形蛋白的蛋白表達下降,而對照組和拮抗劑組表達正常。三組中波形蛋白mRNA表達無明顯改變。
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