體外白細胞過濾對大腸埃希桿菌型膿毒癥犬天然免疫功能的影響.pdf

1、近年來研究認為,感染或外傷后機體發(fā)生SIRS和MODS足由于過度釋放的炎癥介質(zhì)產(chǎn)生失控的炎癥發(fā)應所導致的,而白細胞在其中起著至關重要的作用。中性粒細胞在黏附分子的介導下與內(nèi)皮細胞緊密黏附,并被各種促炎因子激活。激活的中性粒細胞和單核細胞在趨化因子作用下,經(jīng)毛細血管間隙遷出血管,向組織移行。浸潤的中性粒細胞能釋放30余種介質(zhì),通過兩種主要途徑,造成組織損傷。由于成熟白細胞大部分儲存在骨髓、肝、脾、淋巴等貯血器官中,循環(huán)血液中只占很小的一部

2、分,炎癥反應過程中激活了的白細胞必須先從貯血器官進入循環(huán)血液才能進入組織中發(fā)揮作用。本實驗擬提出“白細胞過濾”假說：在全身炎癥反應過程中通過將循環(huán)血液中白細胞過濾一部分,可有效降低激活的炎癥細胞對組織、臟器造成的直接損傷,減少炎癥細胞產(chǎn)生的炎癥介質(zhì)含量,從而有效保護臟器功能。 第一部分：體外白細胞過濾對健康犬循環(huán)血液天然免疫功能的影響 目的：了解靜脈-靜脈通道的體外白細胞過濾模型對健康犬天然免疫功能的影響,根據(jù)白細胞過濾

3、和恢復與時間的對應關系建立相應的濃度-時間曲線方程。 方法：犬靜脈麻醉后白細胞過濾組行無菌下雙側(cè)頸外靜脈穿刺建立體外白細胞過濾端口,通過輸血導管和白細胞過濾器將犬行體外白細胞過濾。對照組除不建立體外白細胞過濾管道通路,其余操作相同。以開始白細胞過濾為起始時間,檢測白細胞過濾組犬0h、1h、2h、6h及對照組相對應時間點的平均動脈壓、心率、體溫、血漿TNF-α濃度、IL-6濃度、IL-10濃度、中性粒細胞CD11/18與單核細胞C

4、D14表達。根據(jù)設定的16個時間點的白細胞濃度繪制白細胞濃度-時間曲線,以1h點將曲線分為白細胞過濾曲線和白細胞恢復曲線并行曲線擬合,建立最佳曲線方程。 結(jié)果：白細胞過濾組1h、2h、6h相對于0h平均動脈壓升高的程度高于對照組(P<0.05),2h相對于0h時心率下降的程度大于對照組(P<0.05),體溫低于對照組(P<0.05),白細胞過濾組白細胞濃度低于對照組(P<0.05),白細胞過濾組與對照組紅細胞濃度變化無統(tǒng)計學差異

5、,白細胞過濾組血小板濃度低于對照組(P<0.05),白細胞過濾組血漿TNF-α濃度、CD11/18、CD14的表達與對照組無統(tǒng)計學差異,血漿IL-6濃度低于對照組,2h與6h相對于0h時血漿IL-10濃度增高的程度高于對照組(P<0.05)。 白細胞過濾曲線的最佳擬合方程為:y=7.479-0.152x+0.004x2-3.89×10-5x3(R2=0.987)和白細胞恢復曲線的最佳擬合方程為:y=0.943+0.111x-0.

6、001x2+7.27×10-7x3(R2=0.940)。 結(jié)論：靜脈-靜脈通道的體外白細胞過濾可有效降低健康犬白細胞濃度,對犬的血流動力學無影響,不激活犬白細胞天然免疫功能。體外白細胞過濾可能通過減少白細胞濃度抑制全身炎癥反應對機體的損傷。 第二部分：體外白細胞過濾對健康犬肺與肝組織的影響 目的：了解靜脈-靜脈通道的體外白細胞過濾模型對健康犬臟器是否有損傷作用。 方法：犬靜脈麻醉后白細胞過濾組行無菌下雙側(cè)

7、頸外靜脈穿刺建立體外白細胞過濾端口,通過輸血導管和白細胞過濾器將犬行體外白細胞過濾。對照組除不建立體外白細胞過濾管道通路,其余操作相同。于6h取肺組織和肝組織,測定兩組MPO酶活力,HE染色后行肺組織病理學評分,測定肺與肝NF-kB活性。 結(jié)果：白細胞過濾組與對照組肺組織與肝組織MPO酶活力,肺組織病理學評分,肺組織與肝組織NF-kB活性統(tǒng)計學均無差異(P>0.05)。 結(jié)論：靜脈-靜脈通道的體外白細胞過濾未對機體臟器造

8、成損傷。 第三部分：體外白細胞過濾對大腸埃希桿菌型膿毒癥犬天然免疫功能的影響 目的：建立大腸埃希桿菌型膿毒癥犬模型,了解體外白細胞過濾方法對膿毒癥犬天然免疫功能的影響。 方法：大腸埃希桿菌(O111:B4)經(jīng)靜脈注入健康犬體內(nèi)建立大腸埃希桿菌型膿毒癥犬模型。將膿毒癥犬隨機分為白細胞過濾組和對照組。白細胞過濾組將犬行體外白細胞過濾,對照組除不建立體外白細胞過濾管道通路,其余操作相同。以開始注入大腸埃希氏桿菌點為O'

9、h,開始白細胞過濾時間點為0h。檢測白細胞過濾組犬0'h、0h、1.5h、5h及對照組相對應時間點的平均動脈壓、心率、體溫、動脈血氣、血漿TNF-α濃度、IL-6濃度、IL-10濃度、中性粒細胞CD11/18與單核細胞CD14表達。取肺腎組織病理鏡檢,測定肺泡灌沈液中TNF-α、IL-6、IL-10濃度,行細胞計數(shù),測定肺濕/干重比。 結(jié)果：白細胞過濾組MAP高于對照組(P<0.05);白細胞過濾組與對照組心率變化無統(tǒng)計學差異；

10、白細胞過濾組體溫1.5h相對于0h下降的程度低于對照組(P<0.05);白細胞過濾組RBC濃度、PLT濃度變化與對照組無統(tǒng)計學差異；白細胞過濾組白細胞濃度1.5h相對與0h下降的程度低于對照組(P<0.05);白細胞過濾組pH值、PO2、PCO2、BE、Lac變化與對照組有統(tǒng)計學差異(P<0.05);白細胞過濾組與對照組血清TNF-α濃度、IL-6濃度無統(tǒng)計學差異；白細胞過濾組IL-10濃度高于對照組(P<0.05);CD11/18的表

11、達白細胞過濾組5h相對于0h點下降的程度高于對照組P<0.05);白細胞過濾組CD14的表達低于對照組(P<0.05);白細胞過濾組肺泡灌洗液中TNF-α,IL-6濃度與對照組無統(tǒng)計學差異；白細胞過濾組肺泡灌沈液中IL-10濃度高于對照組,(P<0.05);白細胞過濾組肺泡灌洗液中細胞計數(shù)低于對照組(P<0.05);肺組織濕/干重比無統(tǒng)計學差異。 結(jié)論：體外白細胞過濾可以有效改善大腸埃希桿菌型膿毒癥犬的血流動力學、動脈血氣,對血