雷洛昔芬對(duì)GH3細(xì)胞Seladin-1基因表達(dá)與細(xì)胞增殖和凋亡的影響.pdf

1、目的：探討選擇性雌激素受體拮抗劑雷洛昔芬對(duì)大鼠垂體瘤GH3細(xì)胞株seladin-1基因表達(dá)及其對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖和凋亡的影響,分析seladin-1基因的功能及其在垂體瘤發(fā)生和發(fā)展中的調(diào)控機(jī)制,進(jìn)一步為垂體腺瘤的藥物干預(yù),以seladin-1為靶點(diǎn)的基因治療和藥物治療提供試驗(yàn)依據(jù)。方法：大鼠垂體瘤GH3細(xì)胞常規(guī)在37℃、5%CO2、100%濕度的孵箱中培養(yǎng),以不同濃度(0.1nmol/L、1nmol/L、10nmol/L、100nmol/L

2、、1000nmoi/L)的雷洛昔芬作用于大鼠垂體瘤GH3細(xì)胞,培養(yǎng)48小時(shí)后檢測(cè)雷洛昔芬的作用效果；以western blot檢測(cè)seladin-1基因在不同濃度藥物下蛋白表達(dá)、熒光定量RT-PCR檢測(cè)seladin-1基因在不同濃度藥物下seladin-1mRNA表達(dá)、Cell Counting kits-8(CCK-8)試劑盒檢測(cè)不同濃度藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖的影響和TUNEL試劑盒檢測(cè)不同濃度藥物對(duì)大鼠垂體瘤GH3細(xì)胞凋亡的不同影響。

3、結(jié)果：1.雷洛昔芬在10nmol/L-1000nmol/L的濃度范圍抑制seladin-1mRNA表達(dá)(P<；0.05),在10nmol/L~100nmol/L, GH3細(xì)胞seladin-1mRNA表達(dá)下降最顯著,0.1nmol/L、1nmol/L組與對(duì)照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>；0.05)。2.雷洛昔芬在所有實(shí)驗(yàn)組均抑制seladin-1基因蛋白表達(dá)(P<；0.05),在0.1nmol/L、1nmol/L、10nmo

4、l/L、100nmol/L組表現(xiàn)為,隨著藥物濃度的升高,GH3細(xì)胞seladin-1蛋白表達(dá)呈現(xiàn)下降趨勢(shì)(P<；0.05),而在100nmol/L、1000nmol/L表現(xiàn)為,隨著藥物濃度的升高,GH3細(xì)胞seladin-1蛋白表達(dá)呈上升趨勢(shì)(P<；0.05),在100nmol/L實(shí)驗(yàn)組,GH3細(xì)胞seladin-1蛋白表達(dá)下降最為明顯。3.雷洛昔芬在10~1000nmol/L實(shí)驗(yàn)組能夠抑制GH3細(xì)胞生長(zhǎng)(P<；0.05),

5、在10~100nmol/L實(shí)驗(yàn)組抑制最顯著,0.1~1nmol/L實(shí)驗(yàn)組未見明顯抑制,與陰性對(duì)照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>；0.05)4TUNEL試劑盒檢測(cè)雷洛昔芬在10~1000nmol/L濃度對(duì)大鼠垂體瘤GH3有效誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡(P<；0.05)。結(jié)論：1.雷洛昔芬能夠抑制大鼠垂體瘤GH3細(xì)胞株seladin-1mRNA和蛋白的表達(dá),并且在10~1000nmol/L濃度范圍均受到抑制,抑制程度二者表現(xiàn)有一致性；2.雷洛昔芬能