高表達(dá)RYBP基因?qū)﹂g充質(zhì)干細(xì)胞增殖與凋亡的影響.pdf

1、目的：RYBP與細(xì)胞凋亡關(guān)系密切，已有的研究發(fā)現(xiàn)RYBP高表達(dá)可以誘導(dǎo)實體瘤細(xì)胞系的凋亡，沉默HL60細(xì)胞系的RYBP則降低HL60細(xì)胞系的凋亡，但關(guān)于RYBP對正常細(xì)胞增值和凋亡的影響則研究偏少。本實驗的研究目的就是在間充質(zhì)干細(xì)胞中高表達(dá)RYBP后研究RYBP對增值和凋亡的影響，也進(jìn)一步探討RYBP在正常細(xì)胞中的作用。這也指導(dǎo)我們在未來是否可以將RYBP作為部分腫瘤的特異性治療靶點提供依據(jù)。
　　方法：⑴利用攜帶RYBP基因的穿

2、梭質(zhì)粒通過LR反應(yīng)構(gòu)建慢病毒表達(dá)載體。⑵將構(gòu)建好的慢病毒表達(dá)載體與第三代慢病毒包裝系統(tǒng)SL3、SL4、SL5通過Lipofectamine2000及Opti-MEM轉(zhuǎn)移至293FT細(xì)胞中包裝病毒并轉(zhuǎn)染間充質(zhì)干細(xì)胞，通過GFP熒光觀察轉(zhuǎn)染效率。⑶嘌林霉素篩選獲得穩(wěn)定轉(zhuǎn)染RYBP的間充質(zhì)干細(xì)胞。⑷對穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行western和real-time PCR驗證。
　　結(jié)果：①成功構(gòu)建攜帶RYBP基因的慢病毒表達(dá)載體，并通過P

3、CR驗證和測序檢測正確。②成功包裝病毒，并成功轉(zhuǎn)染間充質(zhì)干細(xì)胞，嘌林霉素篩選后獲得穩(wěn)定轉(zhuǎn)染RYBP的間充質(zhì)干細(xì)胞。③Western和real-time PCR驗證證實RYBP成功轉(zhuǎn)染間充質(zhì)干細(xì)胞。④發(fā)現(xiàn)高表達(dá)RYBP對間充質(zhì)干細(xì)胞的凋亡并無影響。
　　結(jié)論：⑴高表達(dá)RYBP對對間充質(zhì)干細(xì)胞的凋亡并無影響，這說明RYBP在某些腫瘤細(xì)胞和部分正常細(xì)胞中對凋亡的影響存在差異，這也揭示部分正常細(xì)胞具有自主執(zhí)行凋亡的能力。⑵這種RYBP對凋