柑橘果膠酯酶的基因克隆.pdf

1、本文對(duì)柑橘皮中的PME進(jìn)行了研究。具體研究結(jié)果如下： 1.根據(jù)核苷酸序列分析結(jié)果設(shè)計(jì)引物，利用RT-PCR技術(shù)從柑橘皮組織總RNA中擴(kuò)增獲得PME基因，并成功地克隆到pGEM-T easy載體上，基因全長(zhǎng)為1797bp，開放閱讀框架長(zhǎng)1785bp，編碼594個(gè)氨基酸。序列分析表明：氨基酸序列中含有5個(gè)潛在的糖基化位點(diǎn)，在29到48位之間可能是信號(hào)肽區(qū)域。其最大可能剪切(most likely cleavage site)位點(diǎn)可能在

2、45和46位之間即：VVT-Ⅱ。大約在20-50位氨基酸之間含有一個(gè)典型的疏水性區(qū)域，這很有可能含有一個(gè)跨膜區(qū)。但是親水性分析表明該P(yáng)ME序列具有高度親水性。另外通過序列對(duì)比分析發(fā)現(xiàn)PME基因含有四個(gè)非常保守的Cys殘基，筆者認(rèn)為這個(gè)四個(gè)保守的Cys殘基參與二硫橋的形成，因此與PME結(jié)構(gòu)有很大關(guān)系。 2.通過ClustalW軟件分析表明，該P(yáng)ME基因其實(shí)就是可隆正確的Citrussinensis的CsPME4基因。但是它與Citr

3、us sinensis其他的PME基因在進(jìn)化上有很大差別，從而他們的性質(zhì)應(yīng)該有很大不同，而這與文獻(xiàn)報(bào)道的CsPME4是一種不同于另外兩種PME的熱穩(wěn)定性酶一致。同時(shí)，根據(jù)進(jìn)化分析表明，筆者認(rèn)為在亞麻(Linum usitatissimum(flax))中很可能存在類似該熱穩(wěn)定性的PME。 3.本實(shí)驗(yàn)采用鹽提法從柑橘皮中提取果膠酯酶，用pH-stat法測(cè)定酶在不同溫度和不同pH下的活性，得到如下結(jié)果：所提取的酶最適溫度在50℃左右，