人臍帶間充質(zhì)干細胞修復(fù)大鼠坐骨神經(jīng)缺損的實驗研究.pdf

1、目的:周圍神經(jīng)缺損的修復(fù)和重建一直是臨床醫(yī)生面臨的一大難題。治療周圍神經(jīng)缺損的傳統(tǒng)方法是自體神經(jīng)移植,其效果雖然比較理想,但會造成所移植神經(jīng)支配區(qū)相應(yīng)功能的缺失,所以無法在臨床得到廣泛的應(yīng)用。因此,尋找一種新的神經(jīng)移植體來代替自體神經(jīng)移植引起了人們的廣泛關(guān)注。近年來,組織工程學的興起為人們提供了一種新的思路-組織工程神經(jīng)。組織工程學興起于20世紀80年代,它是一門新興的邊緣學科。組織工程學就是把組織學和工程學有機結(jié)合,以天然或由人工合成

2、生物材料為載體并復(fù)合種子細胞,在體外構(gòu)建有生命的復(fù)合體來植入體內(nèi)以修復(fù)相應(yīng)的組織缺損。以臍帶間充質(zhì)干細胞作為組織工程神經(jīng)的種子細胞目前在國內(nèi)外尚無前例,本實驗的目的在于:將人臍帶間充質(zhì)干細胞作為組織工程神經(jīng)種子細胞與去細胞神經(jīng)基膜管復(fù)合在一起構(gòu)建成組織工程神經(jīng),用于修復(fù)大鼠坐骨神經(jīng)缺損(10mm),并以自體神經(jīng)橋接組和單純?nèi)ゼ毎窠?jīng)基膜管組作為對照,以探討此手術(shù)的可行性并對其效果進行評價。
　　 方法：1.無菌條件下取正常月齡胎

3、兒臍帶,用磷酸鹽緩沖液充分清洗并去除臍動脈和臍靜脈,將余下臍帶組織剪成約1mm×1mm×1mm大小的碎塊,接種于間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)基中,37℃、體積分數(shù)為5％CO2孵箱內(nèi)培養(yǎng),2周后,去掉組織塊更換培養(yǎng)基。貼壁細胞長到80％左右融合時,用濃度為2.5 g/L的胰酶進行消化、傳代和培養(yǎng)。取第5代細胞經(jīng)免疫組化鑒定,證實為間充質(zhì)干細胞后,用黃芪(100μl/ml)誘導成神經(jīng)元樣細胞,并作為種子細胞儲存?zhèn)溆谩?.取10只健康成年雄性SD大鼠,參

4、照Dument(1997)和Sondcll(1998)的化學萃取法制備去細胞神經(jīng)基膜管。將誘導后的臍帶間充質(zhì)干細胞以一定的濃度(107/ml)在顯微手術(shù)鏡下用100μl玻璃筒不銹鋼針頭微量加樣器注入神經(jīng)基膜管內(nèi),注射后當即在DMEM-10％FBS液中培養(yǎng),并通過石蠟切片HE染色觀察細胞在橋接物內(nèi)生長情況。待種子細胞爬滿基膜管后,再繼續(xù)培養(yǎng)一周,并為植入體內(nèi)作儲備。3.另取30只健康成年雄性SD大鼠,建立單側(cè)坐骨神經(jīng)缺損(10mm)模型并

5、隨機分成三組,每組10只。A組(實驗組):為臍帶間充質(zhì)干細胞復(fù)合去細胞神經(jīng)基膜管組,用預(yù)先構(gòu)建好的組織工程神經(jīng)橋接缺損的大鼠坐骨神經(jīng)；B組(空白對照組):為單純?nèi)ゼ毎窠?jīng)基膜管組,即用未復(fù)合種子細胞的神經(jīng)基膜管橋接神經(jīng)缺損；C組(標準對照組):為自體神經(jīng)橋接組,將取下的神經(jīng)遠近端調(diào)整后進行縫合。術(shù)后10周通過神經(jīng)電生理檢測、組織學觀察等評測手術(shù)療效。
　　 結(jié)果：術(shù)后各項檢測指標表明:臍帶間充質(zhì)干細胞復(fù)合去細胞神經(jīng)基膜管組(A組