人TNF-β基因轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞對Survivin表達(dá)的影響.pdf

1、目的：脂質(zhì)體介導(dǎo)人TNF-β基因轉(zhuǎn)染人肝癌細(xì)胞HepG<,2>，檢測TNF-β的表達(dá)，并同時檢測、分析轉(zhuǎn)染后HepG<,2>細(xì)胞中Survivin的表達(dá)。 方法：用本實驗室已成功制備的TNF-β真核細(xì)胞表達(dá)質(zhì)粒pcDNA4C-TNF-β cDNA及其轉(zhuǎn)化的E．coliJM-109感受態(tài)大腸桿菌，經(jīng)質(zhì)粒提取后，以脂質(zhì)體為中介轉(zhuǎn)染培養(yǎng)的人肝癌細(xì)胞HepG2，同時設(shè)立對照組(未轉(zhuǎn)染組)。分別于轉(zhuǎn)染后12h，24h，48h，72h和5d

2、收集HepG2細(xì)胞及細(xì)胞上清液。取細(xì)胞上清液用EuSA法檢測TNF-β表達(dá)。將收集的細(xì)胞充分裂解，取細(xì)胞裂解上清液用ELISA法檢測Survivin表達(dá)。繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，JMTJFX 10.32統(tǒng)計分析軟件進(jìn)行相關(guān)統(tǒng)計檢驗。 結(jié)果：轉(zhuǎn)染后，ELlSA法成功檢測到轉(zhuǎn)染組中TNF-β的表達(dá)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，相關(guān)系數(shù)r=0.991，TNF-β的表達(dá)量24h最高，5d最低。同時檢測到對照組中Survivin的表達(dá)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，相關(guān)系數(shù)r=

3、0.985。對照組中Survivin的表達(dá)量24h最高，5d最低，轉(zhuǎn)染組中Survivin的明顯下降，統(tǒng)計學(xué)分析有高度統(tǒng)計意義。 結(jié)論：利用脂質(zhì)體將質(zhì)粒pcDNA4C-TNF-β cDNA成功轉(zhuǎn)染HepG<,2>細(xì)胞，轉(zhuǎn)染后TNF-β穩(wěn)定表達(dá)。Survivin在對照組HepG<,2>細(xì)胞中明顯表達(dá)，而TNF-β基因轉(zhuǎn)染后HepG<,2>細(xì)胞中Survivin的表達(dá)明顯下調(diào)。為進(jìn)一步研究TNF-β及Survivin對HepG<,2