PIM-2在HepG2細(xì)胞和L-O2細(xì)胞中的表達(dá).pdf

1、腫瘤的發(fā)生和發(fā)展是一個(gè)多因素、多步驟和多基因參與的過程。抑癌基因的失活和/或癌基因的激活是其中最基本的分子事件。而抑癌基因或癌基因主要通過誘導(dǎo)或阻止細(xì)胞凋亡來防止或促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展。在癌基因中，Pim家族的作用引起越來越多的關(guān)注。其中，對Pim-2信號通路的研究目前國內(nèi)外才剛剛開始展開，初步的結(jié)論該通路有著非常強(qiáng)大的抗凋亡作用，在促進(jìn)腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用不可低估，并且同已知的其他凋亡抑制蛋白，如c-Myc、Bcl家族、Akt等蛋白相比

2、，Pim-2抑制凋亡的機(jī)制是截然不同的。 最近，在實(shí)體腫瘤前列腺癌中發(fā)現(xiàn)了該途徑的存在。如果證實(shí)了該途徑在肝細(xì)胞肝癌中的作用，并進(jìn)一步明確其信號通路組成和調(diào)控凋亡的作用機(jī)理，將為肝細(xì)胞肝癌提供新的基因治療靶點(diǎn)，具有較大的研究價(jià)值和應(yīng)用前景。在本部分實(shí)驗(yàn)中，我們利用HepG2細(xì)胞為肝細(xì)胞肝癌細(xì)胞株的典型代表，L-02作為正常肝細(xì)胞的代表，研究PIM-2在itepG2細(xì)胞和L-02細(xì)胞表達(dá)的情況。 目的：通過檢測PIM-2m

3、RNA及蛋白在ltepG2細(xì)胞和L-02細(xì)胞表達(dá)的情況，探討PIM-2在原發(fā)性肝細(xì)胞肝癌發(fā)生中的作用，為進(jìn)一步開展PIM-2基因調(diào)控肝癌細(xì)胞凋亡的信號通路研究提供可行性及初步的實(shí)驗(yàn)依據(jù) 方法：以人肝細(xì)胞肝癌(hepatocelluarcarcinoma,HCC)細(xì)胞株HepG2及正常肝細(xì)胞株L-02為研究對象，在完全、高糖DMEM培養(yǎng)基(含10％胎牛血清)中培養(yǎng)細(xì)胞，倒置顯微鏡下觀察其形態(tài)，對數(shù)生長期行HE染色；RT-PCR分別

4、檢測HepG2細(xì)胞及L-02細(xì)胞中PIM-2的mRNA表達(dá)，DocGel2000凝膠圖像分析系統(tǒng)成像，并以Bio-ImageAnalysisSystem進(jìn)行分析；用SABC法免疫細(xì)胞化學(xué)檢測HepG2細(xì)胞及L-02細(xì)胞中PIM-2蛋白表達(dá)，應(yīng)用北航CM-2000B型生物醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)對免疫細(xì)胞化學(xué)圖片染色圖像進(jìn)行體視學(xué)分析，得出平均光密度。實(shí)驗(yàn)所得數(shù)據(jù)以均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差((x)±s)表示；數(shù)據(jù)分析采用SPSS10．0軟件，t檢驗(yàn)，P

5、01表示有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 結(jié)果：(1)形態(tài)學(xué)觀測：HepG2細(xì)胞及L-02細(xì)胞在對數(shù)生長期生長狀況良好，透明度大，折光性強(qiáng)，輪廓不清，并可見許多分裂期細(xì)胞；(2)細(xì)胞爬片免疫細(xì)胞化學(xué)示L-02細(xì)胞Pim-2蛋白表達(dá)非常微弱，幾乎難以顯現(xiàn)，而HepG2細(xì)胞Pim-2蛋白呈強(qiáng)陽性表達(dá)，其陽性產(chǎn)物呈棕黃色，主要分布于胞漿和胞核。圖像分析示免疫細(xì)胞化學(xué)細(xì)胞爬片平均光密度L-02細(xì)胞：O．108+0．016；HepG2細(xì)胞：0．438+0．0

6、11：兩者的平均光密度經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析有顯著性差異(P<0．01)；(3)正常肝細(xì)胞株L-02PIM-2／p．a(chǎn)ctin相對光密度均值：O．181+0．025；人肝癌細(xì)胞株HepG2PIM-2／p—actin相對光密度均值：0．754+0．035。L-02PIM-2mRNA的表達(dá)水平較HepG2低(P