滋補(bǔ)脾陰方藥對(duì)脾陰虛糖尿病腦病大鼠海馬胰島素抵抗影響的研究.pdf

1、目的：糖尿病腦?。╠iabetic encephalopathy，DE）是糖尿病中樞神經(jīng)系統(tǒng)并發(fā)癥之一，是一種常見的慢性進(jìn)展性疾病。臨床主要表現(xiàn)為輕、中度認(rèn)知功能障礙，學(xué)習(xí)、記憶、解決問題的能力下降。出現(xiàn)糖尿病腦病時(shí)，大腦無(wú)論是在形態(tài)學(xué)、神經(jīng)電生理學(xué)還是在分子生物學(xué)上都存在著相應(yīng)的變化。雖然研究者們已從多方面、多角度地去研究糖尿病腦病，但是至今為止，糖尿病腦病的發(fā)病機(jī)制還不是很清楚。最近的研究發(fā)現(xiàn)，胰島素（insulin）對(duì)神經(jīng)細(xì)胞來(lái)說

2、是一種神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子，腦內(nèi)胰島素生物效能的變化對(duì)糖尿病患者中樞神經(jīng)系統(tǒng)有著重要的影響。胰島素生物效能的發(fā)揮是通過胰島素與胰島素受體底物相結(jié)合激活胰島素信號(hào)途徑來(lái)實(shí)現(xiàn)的。當(dāng)胰島素信號(hào)通路受到影響時(shí)，就會(huì)出現(xiàn)胰島素抵抗（insulin resistance，IR），即正常劑量的胰島素產(chǎn)生低于正常生物學(xué)效應(yīng)的狀態(tài)。本課題組既往的研究表明，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激（endoplasmic reticulum stress，ERS）對(duì)阿爾茨海默病（Alzheim

3、er's disease，AD）的發(fā)病及病理產(chǎn)物的形成有著重要的影響。而在阿爾茨海默病患者的腦脊液中胰島素濃度有所升高，枕葉區(qū)域胰島素受體密度增加，酪氨酸激酶活性減少。而且大量的研究證明了內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激與胰島素抵抗也存在著密切的關(guān)系。故本實(shí)驗(yàn)以內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激為切入點(diǎn)，對(duì)深入探討糖尿病腦病的發(fā)病機(jī)制和防治具有十分重要意義。祖國(guó)醫(yī)學(xué)將糖尿病稱為消渴病。其基本病機(jī)為陰虛燥熱。雖與肺、脾、腎有關(guān)。但脾虛致消的論點(diǎn)越來(lái)越受到重視。滋補(bǔ)脾陰方藥（Zibu

4、Piyin Recipe，ZBPYR）是戰(zhàn)麗彬教授以清代吳澄《不居集》的資成湯為基礎(chǔ)并結(jié)合多年實(shí)踐化裁而成，以培補(bǔ)后天、滋補(bǔ)脾陰為立方原則。以往的研究表明，ZBPYR具有保護(hù)原代海馬神經(jīng)元對(duì)抗Ap毒性，減輕內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激，促進(jìn)蛋白質(zhì)折疊，改善衰老個(gè)體學(xué)習(xí)記憶能力等神經(jīng)保護(hù)及延緩腦衰老進(jìn)程作用。因此，本實(shí)驗(yàn)將探討滋補(bǔ)脾陰方藥對(duì)脾陰虛糖尿病腦病大鼠海馬胰島素信號(hào)通路改變的調(diào)節(jié)作用及其可能的機(jī)制。 方法： 1．SPF級(jí)健康成年雄性

5、SD大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)3d后隨機(jī)分為空白對(duì)照組、脾陰虛組、糖尿病腦病組、脾陰虛糖尿病腦病組和脾陰虛糖尿病腦病+ZBPYR治療組5組，每組4只。 2．適應(yīng)性喂養(yǎng)結(jié)束后，空白對(duì)照組和脾陰虛組仍以普通飼料喂養(yǎng)，糖尿病腦病組、脾陰虛糖尿病腦病組和脾陰虛糖尿病腦病+ZBPYR治療組改高脂飼料喂養(yǎng)，4w后糖尿病模型大鼠按30mg/kg的劑量一次性腹腔注射1%的鏈脲佐菌素（streptozocin，STZ）溶液。72h后尾靜脈采血測(cè)量隨機(jī)血糖，隨

6、機(jī)血糖>16．7mmol/L的大鼠確定為糖尿病模型，并在STZ注射后的第4、8、12d分別檢測(cè)空腹血清胰島素水平（FSI），做口服葡萄糖耐量實(shí)驗(yàn)（OGTT）和胰島素耐量實(shí)驗(yàn)（ITT）。糖尿病模型成功建立后，在此基礎(chǔ)上用18d的時(shí)間通過疲勞加饑飽飲食失常的復(fù)合因素造模的方法建立脾氣虛證候模型，再在脾氣虛證候模型的基礎(chǔ)上通過灌服傷陰藥9d最終建立脾陰虛糖尿病腦病病證結(jié)合模型。之后停止施加任何造模因素后，對(duì)脾陰虛糖尿病腦病+ZBPYR治療組給

7、予ZBPYR治療16d，斷頭取海馬。造模期間觀察各組大鼠的體征變化。 3．通過跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)和Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)進(jìn)行行為學(xué)測(cè)試，比較各組大鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力的改變。 4．通過Western blotting方法檢測(cè)各組大鼠海馬IRS-1、JNK和IRE1α蛋白表達(dá)的變化。 結(jié)果： 1．STZ注射后糖尿病模型大鼠隨機(jī)血糖明顯高于非糖尿病模型大鼠（P<0．01）。在口服葡萄糖耐量實(shí)驗(yàn)（OGTT）中，糖尿病模型大

8、鼠出現(xiàn)糖耐量異常；在胰島素耐量實(shí)驗(yàn)（ITT）中糖尿病模型大鼠血糖下降速率比非糖尿病模型大鼠血糖下降的速率要慢，說明糖尿病模型大鼠存在胰島素抵抗現(xiàn)象。但空腹血清胰島素水平糖尿病模型大鼠與非糖尿病模型大鼠無(wú)明顯差異（P>0．05）。 2．脾陰虛組表現(xiàn)出飲水量增加（P<0．01），肛溫升高（P<0．05）等陰虛內(nèi)熱癥狀；行為學(xué)結(jié)果顯示糖尿病腦病組和脾陰虛糖尿病腦病組學(xué)習(xí)記憶能力降低（P<0．05）；脾陰虛糖尿病腦病+ZBPYR治療組學(xué)

9、習(xí)記憶能力有所改善（P<0．05）。 3．Western Blotting結(jié)果顯示：與空白對(duì)照組、脾陰虛組相比，糖尿病腦病組、脾陰虛糖尿病腦病組海馬的磷酸化IRS-1、磷酸化JNK和總IRE1α蛋白表達(dá)增強(qiáng)（P<0．05），經(jīng)滋補(bǔ)脾陰方藥治療后磷酸化IRS-1、磷酸化JNK和總IRE1α蛋白表達(dá)減弱。 結(jié)論： 1．通過先病后證的造模方法成功建立了脾陰虛糖尿病腦病動(dòng)物模型，行為學(xué)測(cè)試糖尿病腦病組、脾陰虛糖尿病腦病組