滋補脾陰方藥對脾陰虛糖尿病腦病大鼠海馬胰島素抵抗影響的研究.pdf

1、目的：糖尿病腦病（diabetic encephalopathy，DE）是糖尿病中樞神經(jīng)系統(tǒng)并發(fā)癥之一，是一種常見的慢性進展性疾病。臨床主要表現(xiàn)為輕、中度認知功能障礙，學習、記憶、解決問題的能力下降。出現(xiàn)糖尿病腦病時，大腦無論是在形態(tài)學、神經(jīng)電生理學還是在分子生物學上都存在著相應的變化。雖然研究者們已從多方面、多角度地去研究糖尿病腦病，但是至今為止，糖尿病腦病的發(fā)病機制還不是很清楚。最近的研究發(fā)現(xiàn)，胰島素（insulin）對神經(jīng)細胞來說

2、是一種神經(jīng)營養(yǎng)因子，腦內(nèi)胰島素生物效能的變化對糖尿病患者中樞神經(jīng)系統(tǒng)有著重要的影響。胰島素生物效能的發(fā)揮是通過胰島素與胰島素受體底物相結(jié)合激活胰島素信號途徑來實現(xiàn)的。當胰島素信號通路受到影響時，就會出現(xiàn)胰島素抵抗（insulin resistance，IR），即正常劑量的胰島素產(chǎn)生低于正常生物學效應的狀態(tài)。本課題組既往的研究表明，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激（endoplasmic reticulum stress，ERS）對阿爾茨海默?。ˋlzheim

3、er's disease，AD）的發(fā)病及病理產(chǎn)物的形成有著重要的影響。而在阿爾茨海默病患者的腦脊液中胰島素濃度有所升高，枕葉區(qū)域胰島素受體密度增加，酪氨酸激酶活性減少。而且大量的研究證明了內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激與胰島素抵抗也存在著密切的關(guān)系。故本實驗以內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激為切入點，對深入探討糖尿病腦病的發(fā)病機制和防治具有十分重要意義。祖國醫(yī)學將糖尿病稱為消渴病。其基本病機為陰虛燥熱。雖與肺、脾、腎有關(guān)。但脾虛致消的論點越來越受到重視。滋補脾陰方藥（Zibu

4、Piyin Recipe，ZBPYR）是戰(zhàn)麗彬教授以清代吳澄《不居集》的資成湯為基礎(chǔ)并結(jié)合多年實踐化裁而成，以培補后天、滋補脾陰為立方原則。以往的研究表明，ZBPYR具有保護原代海馬神經(jīng)元對抗Ap毒性，減輕內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激，促進蛋白質(zhì)折疊，改善衰老個體學習記憶能力等神經(jīng)保護及延緩腦衰老進程作用。因此，本實驗將探討滋補脾陰方藥對脾陰虛糖尿病腦病大鼠海馬胰島素信號通路改變的調(diào)節(jié)作用及其可能的機制。 方法： 1．SPF級健康成年雄性

5、SD大鼠適應性喂養(yǎng)3d后隨機分為空白對照組、脾陰虛組、糖尿病腦病組、脾陰虛糖尿病腦病組和脾陰虛糖尿病腦病+ZBPYR治療組5組，每組4只。 2．適應性喂養(yǎng)結(jié)束后，空白對照組和脾陰虛組仍以普通飼料喂養(yǎng)，糖尿病腦病組、脾陰虛糖尿病腦病組和脾陰虛糖尿病腦病+ZBPYR治療組改高脂飼料喂養(yǎng)，4w后糖尿病模型大鼠按30mg/kg的劑量一次性腹腔注射1%的鏈脲佐菌素（streptozocin，STZ）溶液。72h后尾靜脈采血測量隨機血糖，隨

6、機血糖>16．7mmol/L的大鼠確定為糖尿病模型，并在STZ注射后的第4、8、12d分別檢測空腹血清胰島素水平（FSI），做口服葡萄糖耐量實驗（OGTT）和胰島素耐量實驗（ITT）。糖尿病模型成功建立后，在此基礎(chǔ)上用18d的時間通過疲勞加饑飽飲食失常的復合因素造模的方法建立脾氣虛證候模型，再在脾氣虛證候模型的基礎(chǔ)上通過灌服傷陰藥9d最終建立脾陰虛糖尿病腦病病證結(jié)合模型。之后停止施加任何造模因素后，對脾陰虛糖尿病腦病+ZBPYR治療組給

7、予ZBPYR治療16d，斷頭取海馬。造模期間觀察各組大鼠的體征變化。 3．通過跳臺實驗和Morris水迷宮實驗進行行為學測試，比較各組大鼠空間學習記憶能力的改變。 4．通過Western blotting方法檢測各組大鼠海馬IRS-1、JNK和IRE1α蛋白表達的變化。 結(jié)果： 1．STZ注射后糖尿病模型大鼠隨機血糖明顯高于非糖尿病模型大鼠（P<0．01）。在口服葡萄糖耐量實驗（OGTT）中，糖尿病模型大

8、鼠出現(xiàn)糖耐量異常；在胰島素耐量實驗（ITT）中糖尿病模型大鼠血糖下降速率比非糖尿病模型大鼠血糖下降的速率要慢，說明糖尿病模型大鼠存在胰島素抵抗現(xiàn)象。但空腹血清胰島素水平糖尿病模型大鼠與非糖尿病模型大鼠無明顯差異（P>0．05）。 2．脾陰虛組表現(xiàn)出飲水量增加（P<0．01），肛溫升高（P<0．05）等陰虛內(nèi)熱癥狀；行為學結(jié)果顯示糖尿病腦病組和脾陰虛糖尿病腦病組學習記憶能力降低（P<0．05）；脾陰虛糖尿病腦病+ZBPYR治療組學

9、習記憶能力有所改善（P<0．05）。 3．Western Blotting結(jié)果顯示：與空白對照組、脾陰虛組相比，糖尿病腦病組、脾陰虛糖尿病腦病組海馬的磷酸化IRS-1、磷酸化JNK和總IRE1α蛋白表達增強（P<0．05），經(jīng)滋補脾陰方藥治療后磷酸化IRS-1、磷酸化JNK和總IRE1α蛋白表達減弱。 結(jié)論： 1．通過先病后證的造模方法成功建立了脾陰虛糖尿病腦病動物模型，行為學測試糖尿病腦病組、脾陰虛糖尿病腦病組