EB病毒誘導(dǎo)臍帶血樹突狀細胞凋亡的實驗研究.pdf

1、目的： EB病毒是一種分布廣，人群感染率高的皰疹病毒。樹突狀細胞是免疫功能最強大的抗原提呈細胞。研究EBV誘導(dǎo)臍帶血單核細胞來源樹突狀細胞分化和凋亡的變化，初步探討其對樹突狀細胞生物活性的影響。
　　 方法：無菌條件下采集足月順產(chǎn)新生兒臍帶血，體外分離純化單核細胞，經(jīng)rhIL-4和rhGM-CSF誘導(dǎo)向樹突狀細胞分化，病毒組在培養(yǎng)的第0天加入B95.8細胞培養(yǎng)上清。FITC-CD14、PE-CD11c和PC5-CD1a三染色流式

2、細胞術(shù)檢測DC表面特異分化表型。Annexin V-FITC/PI雙染色流式細胞術(shù)檢測DC凋亡率，Hoechst 33258染色和TUNEL染色熒光顯微鏡檢測DC凋亡后的形態(tài)學(xué)變化，比色法測定caspase-3、caspase-8和 caspase-9的酶活性。羅丹明123染液檢測線粒體膜電位變化。Western Blot檢測XIAP的表達。
　　 結(jié)果：第7天的兩組細胞表面CD14分子表達下降，而DC相對特異分子CD11c和C

3、D1a表達增加。表明采用GM-CSF和IL-4成功誘導(dǎo)出臍帶血單核細胞來源的DC。病毒組在第5d早期凋亡細胞（Annexin V+/PI-）比率為8.68％±2.72％，與對照組（7.62％±2.64％）相比無顯著性差異。第6、7d的早期凋亡率分別為15.70％±2.83％、16.75％±2.53％，而對照組分別為7.07％±4.79％、4.51％±2.01％。第6、7d兩組相比有顯著性差異（P<0.05）。病毒組細胞出現(xiàn)凋亡形態(tài)學(xué)特征