結(jié)核分枝桿菌PPE家族免疫相關(guān)蛋白PPE68免疫功能的研究.pdf

1、結(jié)核病是由結(jié)核分枝桿菌所引發(fā)的一種傳染病，近年來(lái)，隨著人口流動(dòng)增加、多重耐藥菌株的出現(xiàn)以及結(jié)核分枝桿菌與人類(lèi)免疫缺陷病毒(HIV)的聯(lián)合感染，結(jié)核病對(duì)人類(lèi)的健康形成日益嚴(yán)重的威脅?？ń槊缱鳛轭A(yù)防結(jié)核病的唯一疫苗，其保護(hù)效力卻極不穩(wěn)定，因此越來(lái)越多的研究者致力于結(jié)核分枝桿菌疫苗的研制和開(kāi)發(fā)領(lǐng)域，如毒力基因的研究、疫苗候選基因的篩選及其編碼產(chǎn)物免疫原性與免疫保護(hù)性的研究、以及對(duì)卡介苗的改造等。 結(jié)核分枝桿菌是一種胞內(nèi)致病菌，可以通過(guò)

2、多種機(jī)制逃避機(jī)體免疫細(xì)胞的殺傷及清除，從而在其宿主細(xì)胞——巨噬細(xì)胞中進(jìn)行自我復(fù)制和繁殖，并長(zhǎng)期存活于機(jī)體內(nèi)。當(dāng)機(jī)體免疫能力下降時(shí)，潛伏的結(jié)核桿菌就會(huì)大量繁殖而導(dǎo)致結(jié)核病的發(fā)生。 現(xiàn)已證明，RD1區(qū)基因編碼的蛋白質(zhì)是結(jié)核分枝桿菌的主要毒力因子，在結(jié)核桿菌疫苗研制開(kāi)發(fā)和檢測(cè)診斷方面都受到了廣泛的重視。PPE68蛋白由RD1區(qū)的Rv3873基因所編碼，是RD1區(qū)免疫原性的重要組成部分之一，可以在結(jié)核感染病人體內(nèi)誘發(fā)強(qiáng)烈的T淋巴細(xì)胞反應(yīng)

3、。另外，PPE68做為PPE蛋白家族的成員，其特殊的結(jié)構(gòu)使其可能與結(jié)核分枝桿菌菌壁的高度疏水性及抗原變異有關(guān)，并極有可能在結(jié)核桿菌的致病機(jī)制中起到至關(guān)重要的作用。 組織纖溶酶原激活物(tPA)是一種分泌表達(dá)的蛋白質(zhì)，將其分泌信號(hào)肽序列與目的DNA嵌合表達(dá)，可以增強(qiáng)后者所編碼蛋白質(zhì)的分泌表達(dá)、有利于機(jī)體抗原遞呈細(xì)胞對(duì)其的識(shí)別、處理及遞呈，從而誘導(dǎo)更強(qiáng)的體液免疫和細(xì)胞免疫應(yīng)答的發(fā)生。 本研究將小鼠tPA分泌信號(hào)肽的cDNA與

4、PPE68蛋白的編碼基因Rv3873進(jìn)行嵌合，構(gòu)建嵌合真核重組質(zhì)粒pcDNA-t-Rv3873，在體外轉(zhuǎn)染BALB/C3T3細(xì)胞并獲得穩(wěn)定表達(dá)的基礎(chǔ)上，免疫BALB/C小鼠后檢測(cè)免疫小鼠脾淋巴細(xì)胞體外誘導(dǎo)培養(yǎng)后的增殖活性，IFN-γ產(chǎn)生水平以及CD4+和CD8+T淋巴細(xì)胞的增殖與CD4+/CD8+T淋巴細(xì)胞比例的變化，并將其與pcDNA3.1/Myc-His(+)及pcDNARv3873免疫組的結(jié)果進(jìn)行比較分析發(fā)現(xiàn)，pcDNA-t-Rv

5、3873免疫小鼠的脾淋巴細(xì)胞體外誘導(dǎo)培養(yǎng)后的增殖活性、IFN-γ產(chǎn)生水平以及CD4+和CD8+T淋巴細(xì)胞的增殖及CD4+/CD8+T淋巴細(xì)胞的比例變化均明顯高于pcDNARv3873及pcDNA3.1/Myc-His(+)免疫組。該結(jié)果提示可能由于tPA分泌信號(hào)肽的存在使PPE68的分泌表達(dá)增加，從而誘導(dǎo)了更強(qiáng)的細(xì)胞免疫應(yīng)答的發(fā)生。 本研究比較系統(tǒng)的對(duì)PPE68蛋白的免疫功能及tPA分泌信號(hào)肽序列對(duì)蛋白質(zhì)分泌表達(dá)的影響進(jìn)行了分析