P-選擇素基因多態(tài)性與可溶性P-選擇素濃度、非瓣膜性房顫血栓栓塞的相關(guān)性研究.pdf

1、一、研究背景 P-選擇素（又稱為顆粒膜蛋白GMP140，血小板激活依賴性顆粒外膜蛋白PADGEM或CD62）是一種黏附分子，屬于選擇素（selectin）家族，主要表達(dá)于激活的內(nèi)皮細(xì)胞和血小板表面，介導(dǎo)中性粒細(xì)胞-內(nèi)皮細(xì)胞、中性粒細(xì)胞-血小板等細(xì)胞間反應(yīng)，存在于靜止血小板α顆粒及內(nèi)皮細(xì)胞的Weibel-Palade小體中，以可溶性P-選擇素（souble P-selectin，sP-selectin）形式出現(xiàn)在血漿中。可溶性P

2、-選擇素主要來(lái)源于血小板，可以作為血小板激活的標(biāo)志物。在人血漿里，可溶性P-選擇素已經(jīng)被證實(shí)是血小板活化的產(chǎn)物參與血栓形成。編碼P-選擇素的基因位于人類1號(hào)染色體（1q21-24）上一段長(zhǎng)50 kb的DNA序列，包含17個(gè)外顯子。在ECTIM研究中，確定有13個(gè)P-選擇素的基因多態(tài)性：5個(gè)分布于啟動(dòng)子遠(yuǎn)端和8個(gè)分布于外顯子序列。P-選擇素的基因多態(tài)性可以影響蛋白的肽序列和調(diào)節(jié)序列。以往文獻(xiàn)報(bào)道P-選擇素基因位點(diǎn)的多態(tài)性，其中包括位于啟動(dòng)

3、子遠(yuǎn)端與許多轉(zhuǎn)錄因子（包括AP-1、c-Fos13）結(jié)合部位的2123 C/G、1817 T/C位點(diǎn)和位于第十三外顯子的Thr715Pro位點(diǎn)，并且研究表明，可溶性P-選擇素水平增高與靜脈血栓栓塞事件的風(fēng)險(xiǎn)及P-選擇素基因Thr715Pro位點(diǎn)的多態(tài)性相關(guān)。這些發(fā)現(xiàn)表明了P-選擇素基因多態(tài)性通過(guò)調(diào)節(jié)血漿可溶性P-選擇素水平促進(jìn)血栓栓塞事件的形成。眾所周知，心房顫動(dòng)與血栓栓塞事件的高發(fā)生率密切相關(guān)，很可能是存在著血栓前或高凝的狀態(tài)。在血流

4、動(dòng)力學(xué)危險(xiǎn)因素中涉及到凝血標(biāo)志物，某些凝血標(biāo)志物的基因改變可能增加非瓣膜性心房顫動(dòng)患者發(fā)生血栓栓塞事件的風(fēng)險(xiǎn)。最近研究表明，a-纖維蛋白原基因Thr312Ala位點(diǎn)多態(tài)性跟心房顫動(dòng)并發(fā)血栓栓塞的發(fā)病存在著一定聯(lián)系?；虻母淖?cè)谀屠w維蛋白溶解途徑（凝血危險(xiǎn)因素）對(duì)心房顫動(dòng)中高凝狀態(tài)的發(fā)展所起的作用尚需進(jìn)一步的明確。目前，尚未見(jiàn)P-選擇素基因多態(tài)性與非瓣膜性心房顫動(dòng)患者血栓事件關(guān)聯(lián)性的研究報(bào)告。 二、研究目的 我們的研究

5、以中國(guó)華南地區(qū)非瓣膜性房顫并發(fā)血栓栓塞患者和非瓣膜性房顫患者為研究對(duì)象，應(yīng)用現(xiàn)代分子生物學(xué)方法，對(duì)目前已知的可能涉及房顫血栓栓塞形成的P-選擇素基因2123C/G、1817T/C、Thr715Pro位點(diǎn)多態(tài)性進(jìn)行檢測(cè)，旨在了解中國(guó)房顫人群P-選擇素基因多態(tài)性和可溶性P-選擇素水平及其并發(fā)血栓栓塞事件關(guān)聯(lián)性的情況，從而在分子水平探索遺傳因素在中國(guó)房顫人群血栓栓塞事件發(fā)病中的作用。 三、材料和方法 1．以12導(dǎo)聯(lián)心電圖診斷符

6、合心房顫動(dòng)診斷標(biāo)準(zhǔn)，排除瓣膜性心臟病且經(jīng)CT或MRI診斷為腦卒中或彩色多普勒超聲診斷為靜脈血栓形成的非瓣膜性房顫并發(fā)血栓栓塞患者95例（男49例，女46例）和非瓣膜性房顫患者106例（男51例，女55例）為對(duì)象，測(cè)定相關(guān)的臨床指標(biāo)，包括：高血壓、糖尿病的發(fā)生情況，BMI、血脂水平及纖維蛋白原、C反應(yīng)蛋白。 2．采用酶聯(lián)免疫方法（ELISA）測(cè)定入院時(shí)血漿中可溶性P-選擇素濃度。 3．用試劑盒提取靜脈血白細(xì)胞基因組DNA。

7、P-選擇素的基因型用聚合酶鏈反應(yīng)及限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性法（PCR-RFLP）檢測(cè)，比較P-選擇素基因多態(tài)性在兩組中的差異。在此基礎(chǔ)上，分析兩組之間其他實(shí)驗(yàn)指標(biāo)結(jié)果和上述臨床資料。 四、結(jié)果 1.房顫并發(fā)血栓栓塞組和對(duì)照組臨床特征的比較：病例組在總膽固醇（TC）、C反應(yīng)蛋白水平顯著比對(duì)照組高（P值分別為0．000和0．009）．兩組間平均年齡、性別、體重指數(shù)（BMD、有無(wú)吸煙、高血壓（HP）、糖尿病、甘油三酯（TG）、高密

8、度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）均無(wú)顯著性差異（P>0．05）。 2.P．選擇素基因2123C/G位點(diǎn)基因多態(tài)性與房顫并發(fā)血栓栓塞事件的關(guān)系，相對(duì)CC基因型而言，GG基因型能顯著增加房顫患者血栓事件發(fā)生的危險(xiǎn)性（P<0．05），而1817T/C位點(diǎn)各基因型對(duì)血栓栓塞事件的發(fā)生無(wú)顯著差異（P>0．05）． 3.非瓣膜性房顫并發(fā)血栓栓塞組可溶性P-選擇素血清水平與對(duì)照組存在顯著性差異（P=0．0

9、00）。 4.可溶性P-選擇素血清水平與總膽固醇、C反應(yīng)蛋白水平無(wú)顯著相關(guān)。 5.可溶性P-選擇素血清水平與2123 C/G基因多態(tài)性有顯著相關(guān)性，2123C/G多態(tài)性GG基因型者的可溶性P-選擇素血清水平顯著高于GC+CC基因型（P<0．05），房顫并發(fā)血栓栓塞組和對(duì)照組P-選擇素基因2123C/G位點(diǎn)的基因型和等位基因分布均有顯著性差異（P值分別為0．020和0．015）。 6.可溶性P-選擇素血清水平與18

10、17T/C基因多態(tài)性沒(méi)有顯著性差異（P>0．05），房顫并發(fā)血栓栓塞組和對(duì)照組P-選擇素基因1817T/C位點(diǎn)的基因型和等位基因分布無(wú)顯著性差異（P值分別為0．443和0．207）。 7.本研究在華南漢族人群中未檢測(cè)出Thr715Pro基因多態(tài)性。 五、結(jié)論 1.P-選擇素基因2123 C/G位點(diǎn)的基因多態(tài)性與非瓣膜性房顫并發(fā)血栓栓塞有相關(guān)性，GG基因型可能是非瓣膜性房顫并發(fā)血栓栓塞的易感因素之一。 2.