豬胸膜肺炎放線桿菌三種Apx毒素特性鑒定及對(duì)小鼠免疫保護(hù)力的研究.pdf

1、本文對(duì)胸膜肺炎放線桿菌三種Apx毒素進(jìn)行了提純及生物學(xué)活性與理化特性的鑒定，并進(jìn)行了三種毒素對(duì)小鼠免疫保護(hù)力的研究。 研究根據(jù)APP10型菌只分泌Apx Ⅰ，APP7型菌只分泌A-pX Ⅱ和APP3只分泌ApxⅢ的特點(diǎn)，分別對(duì)APP10、APP7和APP3菌株進(jìn)行培養(yǎng)，收集上清，通過(guò)初提及凝膠過(guò)濾層析獲得了較高純度的Apx Ⅰ、Apx Ⅱ和ApxⅢ三種毒素，并通過(guò)SDS-PAGE進(jìn)行分子量的鑒定，三種毒素的分子量分別為105kD

2、，103kD和120kD。同時(shí)，對(duì)提取的三種毒素進(jìn)行生物學(xué)活性、理化特性的鑒定。生物學(xué)活性試驗(yàn)表明，Apx Ⅰ具有較強(qiáng)的溶血活性和細(xì)胞毒性，Apx Ⅱ具有中度的溶血活性和較弱的細(xì)胞毒性，ApxlII具有強(qiáng)的細(xì)胞毒性，而無(wú)溶血活性。理化特性試驗(yàn)表明，毒素Apx Ⅰ和Apx Ⅱ經(jīng)60℃30min及100℃ 10min的加熱處理后仍有溶血活性，毒素ApxⅢ經(jīng)60℃30min及100℃ 10min的加熱處理后仍有細(xì)胞毒性；三種毒素都能夠耐受5％

3、甲醛2h和1mg/ml蛋白酶K的處理，但活性明顯降低；酸堿度敏感試驗(yàn)中，三種毒素在pH6～8范圍內(nèi)具有最高的生物學(xué)活性。 對(duì)三種毒素的反應(yīng)原性及免疫保護(hù)作用進(jìn)行了研究。用純化的Apx Ⅰ，ApxⅡ和ApxⅢ三種毒素，分別與異型血清做交叉中和試驗(yàn)和瓊擴(kuò)試驗(yàn)檢測(cè)其反應(yīng)原性。在交叉中和試驗(yàn)中，Apx Ⅰ抗原與APP血清型1，5血清；ApxⅡ抗原與APP血清型1，4，5血清；ApxⅢ抗原與APP血清型6，8血清分別出現(xiàn)交叉反應(yīng)；在瓊擴(kuò)試

4、驗(yàn)中，Apx Ⅰ抗原與1，5，9型的血清有交叉反應(yīng)；ApxⅡ抗原與1，4，5，9型的血清有交叉反應(yīng)；ApxⅢ抗原與4，6，8型血清有交叉反應(yīng)。結(jié)果表明A-px毒素抗原可與多個(gè)血清型發(fā)生交叉反應(yīng)。 Apx Ⅰ，Apx Ⅱ和ApxⅢ三種毒素滅活后作為抗原經(jīng)弗氏完全佐劑乳化后免疫小鼠，兩周免疫一次，共三次。每次免疫兩周后將小鼠斷尾采血，采用本室建立的ELISA方法檢測(cè)毒素抗體水平；第三次免疫兩周后，進(jìn)行同源菌株攻毒分別有80％(8/10)，7