甜菜夜蛾抗多殺菌素的機理研究.pdf

1、甜菜夜蛾(SpodopteraexiguaHübner)是一種世界性分布、間歇性大發(fā)生的，以危害蔬菜為主的雜食性害蟲，對農業(yè)生產造成巨大危害。長期的化學防治，甜菜夜蛾已對許多類殺蟲劑產生了很高的抗藥性。多殺菌素是一種作用機制獨特的新型殺蟲劑，對甜菜夜蛾的防治效果顯著，但是近年來發(fā)現(xiàn)甜菜夜蛾已對多殺菌素產生了一定的抗藥性。但是甜菜夜蛾對多殺菌素的抗性機制的研究很少，本研究選用上海市郊的甜菜夜蛾進行了室內敏感和抗性品系的篩選，對甜菜夜蛾抗多

2、殺菌素的機制進行了初步的研究，主要結果如下。 采用浸葉法進行抗性品系的篩選，當篩選到第5代時，抗性是敏感的345.4倍，可以看出甜菜夜蛾對多殺菌素的抗藥性發(fā)展速度較快，易產生高抗性。選用氰戊菊酯、辛硫磷、滅多威、甲氨基阿維菌素、氟氯氰菊酯等5種不同類型的藥劑對多殺菌素進行交互抗性的測定，結果顯示這些藥劑均對多殺菌素沒有交互抗性。用敏感、抗性品系3齡幼蟲通過點滴法分別測定PBO、TPP、DEF、DEM對多殺菌素的增效作用，敏感品系

3、分別增效0.7、0.5、1.0、0.6倍，抗性品系分別增效9.8、1.5、2.6、1.5倍。其中PBO對抗性品系的增效作用最為明顯，為9.8倍。對谷胱甘肽S-轉移酶(GST)和多功能氧化酶O-脫甲基進行了酶活測定，結果GST在抗性品系和敏感品系中活性沒有顯著變化，活性比為1.0倍；抗性品系的多功能氧化酶O-脫甲基活性是敏感品系的5.2倍，表明甜菜夜蛾對多殺菌素的抗性與谷胱甘肽S-轉移酶無關，可能與多功能氧化酶0-脫甲基活性增高有關。

4、 以5齡甜菜夜蛾抗性品系的總RNA為模板，采用一對昆蟲細胞色素P450簡并引物，利用反轉錄—多聚酶鏈式反應(RT-PCR)擴增并篩選出2個新的長度約450bp的甜菜夜蛾細胞色素P450基因cDNA片段，并對這些序列進行了生物信息學分析。結果顯示，這2個P450基因片段分別屬于細胞色素P450CYP4家族的CYP4S和CYP4G2個亞家族，二者分別命名為Secyp4s8-likeSecyp4g31-like基因。其中前一個基因片段的長

5、度為441bp，推導的氨基酸序列長度為146個氨基酸殘基；而后一個基因片段的長度為456bp，推導的氨基酸序列長度為151個氨基酸殘基。 本研究利用熒光定量PCR技術對克隆得到的2個細胞色素P450基因在不同品系甜菜夜蛾體內的表達水平進行了檢測。我們重新設計了熒光定量PCR引物，然后利用絕對定量的方法檢測了這2個基因在不同品系甜菜夜蛾體內的拷貝數(shù)。結果顯示，Secyp4s8-like基因和Secyp4g31-like基因在抗性品