多殺菌素對甜菜夜蛾的作用受體及作用機制的初步研究.pdf

1、多殺菌素類殺蟲劑具有高效，安全，廣譜等特點，是目前最具潛力的生物殺蟲劑之一。研究發(fā)現(xiàn)多殺菌素具有獨特的殺蟲機制，作用時表現(xiàn)出神經(jīng)毒劑特有的中毒癥狀。已有的研究認為多殺菌素主要作用于煙堿型乙酰膽堿受體和γ-氨基丁酸受體，但是其具體的作用機制并不明確。
　　 本研究是以具有殺蟲活性的多殺菌素浸潤葉片喂食甜菜夜蛾，并提取喂食24h的甜菜夜蛾總蛋白。通過比較多殺菌素處理與未處理的甜菜夜蛾的蛋白質(zhì)組的差異，解析多殺菌素對甜菜夜蛾的作用機制

2、，進而對多殺菌素受體蛋白進行初步研究。實驗采用雙向電泳技術(2-DE)分離甜菜夜蛾總蛋白，運用Imagemaster6.0對雙向電泳凝膠圖譜進行斑點檢測、分析，找到差異表達的蛋白，通過酶解消化，借助質(zhì)譜技術和生物信息學軟件鑒定了多殺菌素處理與未處理的差異表達蛋白，并對其功能進行了系統(tǒng)的分析。
　　 通過實驗，我們獲得了多殺菌素處理以及對照的正常幼蟲的2-DE圖譜。應用Imagemaster6.0軟件對掃描得到的2-DE圖譜進行檢

3、測分析，在相同條件下檢測到的蛋白質(zhì)斑點數(shù)分別為多殺菌素處理355個，對照329個。經(jīng)差異比較和顯著性檢驗共得到25個差異蛋白，其中多殺菌素處理后表達上調(diào)的蛋白點13個，表達下調(diào)的蛋白點12個。由于蛋白質(zhì)點低豐度及技術問題的局限，我們對部分差異蛋白進行了質(zhì)譜鑒定。實驗鑒定到了12個表達差異較大的蛋白點(P<0.05)，其中包括羧酸酯酶、細胞色素P450等保護酶，以及ATP酶、蛻皮激素受體蛋白、肌動蛋白等。通過對差異蛋白的分析，發(fā)現(xiàn)這些酶等

4、蛋白分子與昆蟲的生長發(fā)育以及對殺蟲劑的應激反應和解毒代謝等功能相關，為闡明多殺菌素的殺蟲機理和甜菜夜蛾抗性機制提供了重要依據(jù)。
　　 為進一步研究這些蛋白與多殺菌素的作用，本研究選用V-ATPase為研究對象，以巴佛洛霉素A1(V-ATPase抑制劑)與多殺菌素混合使用，對甜菜夜蛾進行生測實驗，結(jié)果顯示加入巴佛洛霉素A1后，多殺菌素殺蟲活性提高，并對V-ATPase活性進行了測定，結(jié)果顯示通過抑制甜菜夜蛾VATPase的活性，使