花生根結(jié)線蟲致病相關(guān)基因的克隆與鑒定及分支酸變位酶基因功能的研究.pdf

1、以花生根結(jié)線蟲(Meloidogynearenaria)一對(duì)無毒和毒性近等基因系(near-isogeniclines，NIL)為材料，用抑制差減雜交技術(shù)(SuppressionSubtractiveHybridization，SSH)，通過反向Northernblot和反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(ReverseTranscription-PolymeraseChainReaction，RT-PCR)篩選獲得了22個(gè)在毒性和無毒M.arena

2、ria間差異表達(dá)的cDNA片段。經(jīng)過BLASTX分析，其中的12個(gè)cDNA片段與已知的基因沒有同源性，其余的10個(gè)和新秀麗小桿線蟲(Caenorhabditiselegans)、真菌和細(xì)菌的基因有較高的同源性。cDNA片段MAAV-117、MAAV-136、MAAV-270和MAAV-551只在無毒的M.arenaria中表達(dá)，在毒性的M.arenaria中不表達(dá)。其余的18個(gè)cDNA只是表達(dá)量上有差異。沒有發(fā)現(xiàn)只在毒性M.arenar

3、ia中表達(dá)，而在無毒M.arenaria中不表達(dá)的cDNA片段。利用該方法只建成了正向差減cDNA文庫(用毒性根結(jié)線蟲cDNA為Driver，無毒根結(jié)線蟲cDNA為Tester)，反向差減cDNA文庫(用無毒根結(jié)線蟲cDNA為Driver，毒性根結(jié)線蟲cDNA為Tester)的差減效率很低。該研究結(jié)果第一次表明，當(dāng)根結(jié)線蟲二齡幼蟲和抗性寄主互作以后，無毒和毒性線蟲群體之間基因表達(dá)有差異，而且都在無毒線蟲群體中特異性表達(dá)，預(yù)示著這些差異表