校園潛伏結核感染的篩查.pdf

1、目的: 用酶聯(lián)免疫斑點實驗（Enzyme-linked immunospot，ELISPOT）和結核菌素皮膚實驗（Tuberculin Skin Test TST）兩種不同的實驗方法檢測的大學生潛伏結核感染（latent tuberculosis infection，LTBI）率；比較2種實驗檢測結果，為將來是否可以以ELISPOT實驗，或者兩種實驗相結合為基礎進行大學生的LTBI的篩查和預防性治療提供初步的理論依據(jù)；如果篩查中

2、出現(xiàn)菌陽的結核病患者，則對獲得的菌株進行基于結核分枝桿菌散在分布重復單位（Mycobacterial interpersed repetitive units，MIRU）的基因分型，擬從長期隨訪過程中獲得多個菌株，從而從分子流行病學與傳統(tǒng)流行病學相結合的角度分析大學生中結核病流行傳播情況，以便更好的控制校園結核病的發(fā)生。 方法: 運用兩種細胞免疫試驗方法-ELISPOT和TST對大學生以及作為對照的校工群體進行LTBI者

3、的篩查。對于胸部透視異常者，進行痰分枝桿菌的培養(yǎng)，對于獲得的菌株進行MIRU基因分型。 結果: 1．學生群體中TST實驗結果獲得率為88．94％（796/895），ELISPOT確定結果獲得率為94．75％（848/895）；校工群體中TST實驗結果獲得率為91．36％（148/162）；ELISPOT確定結果獲得率為95．68％，在學生和校工2個群體中，ELISPOT實驗結果的獲得率均高TST試驗，特別是在學生群體中更

4、有顯著性差異（P<0．01）。 2．學生群體中TST實驗總的陽性率為21．80％（167/766），ELISPOT實驗總的陽性率為13．84％（106/766）；校工群體中TST實驗總的陽性率為22．70％（32/141），ELISPOT實驗總的陽性率為12．77％（18/141），無論是在學生還是校工群體，TST實驗的陽性率均大于ELISPOT實驗陽性率，且差異有統(tǒng)計學意義（P學生<0．01，P校工<0．05）。 3．

5、2個群體中，通過卡方檢驗ELISPOT實驗結果均不受BCG接種的影響（P>0．05），而TST實驗結果顯著受到BCG接種影響（P<0．05）；2種實驗的符合情況采用McNemar檢驗，學生群體中Kappa=0．123；校工群體中Kappa=-0．004，符合性較差。 4．學生群體的ELISPOT實驗陽性結果中，對應的TST實驗硬結直徑的中位數(shù)是11．5mm，；ELISPOT實驗陰性結果中，對應的TST實驗硬結直徑的中位數(shù)是8．7

6、5mm，2組硬結直徑的比較有顯著性差異（P<0．01）；校工群體中2組硬結直徑的比較沒有顯著性差異（P>0．05）。 5．學生群體中， BCG接種組的2種實驗不相符的結果中，ELISPOT（-）/TST（+）人數(shù)所占的比例大于ELISPOT（+）/TST（-）人數(shù)的2倍，而在BCG未接種組，ELISPOT（+）/TST（-）人數(shù)所占的比例大于ELISPOT（-）/TST（+）結果的2倍，且均具有統(tǒng)計學意義。（PBCG接種<0．0

7、1；PBCG未接種<0．05），BCG接種與未接種組間TST實驗硬結直徑的比較也有顯著性差異（P<0．01）；在校工群體沒有得到以上結果。 6．對于學生群體，在ELISPOT（+）、ELISPOT（+）/TST（+）和ELISPOT（+）/TST（-）3組結果中，CFP-10抗原孔產(chǎn)生的T細胞斑點數(shù)的中位數(shù)均為32/106PBMC，而ESAT-6抗原孔產(chǎn)生的T細胞斑點數(shù)的中位數(shù)分別為24/106PBMC、32/106PBMC和2

8、0/106PBMC，除了ELISPOT（+）/TST（+）組中兩種抗原孔產(chǎn)生的斑點中位數(shù)相等外，其余兩組CFP-10抗原孔產(chǎn)生的斑點數(shù)均多于ESAT-6抗原孔且差異均有統(tǒng)計學意義（P<0．05）；ELISPOT（+）/TST（+）組中處于臨界值的反應有6個，占16．22％，ELISPOT（+）/TST（-）處于臨界值的反應有10個，占14．49％。106個ELISPOT陽性結果中，對CFP-10抗原反應的總的陽性率為90．57％，ESA

9、T-6抗原總的陽性率為67．92％；2個率的比較有顯著性差異（P<0．01）；校工群體中，對于以上3種結果ESAT-6抗原孔產(chǎn)生的T細胞斑點數(shù)的中位數(shù)分別為24/106PBMC、30/106PBMC和24/106PBMC，CFP-10抗原孔產(chǎn)生的斑點中位數(shù)34/106PBMC、16/106PBMC和38/106PBMC，ELISPOT（+）/TST（+）組中處于臨界值的反應有2個，占50％，ELISPOT（+）/TST（-）結果組中，沒

10、有處于臨界值的反應，CFP-10抗原孔產(chǎn)生的斑點數(shù)多于ESAT-6抗原孔且差異有統(tǒng)計學意義（P<0．05），CFP-10抗原總的陽性率為72．22％； ESAT-6抗原總的陽性率為61．11％；2個率的比較沒有顯著性差異（P>0．05）。 7．篩查中5人胸部透視異常，后經(jīng)進一步檢查確診4人為結核患者，1人為氣胸。這4名結核患者包括1人為菌陽性肺結核，2人為菌陰性肺結核，另外1人為結核性胸膜炎。利用MIRU分型技術確定該菌株的基因

11、型為“223325173533”。 結論: 通過利用ELISPOT和TST實驗對大學生進行LTBI的篩查，初步掌握了用兩種不同的細胞免疫方法獲得的LTBI率，用MIRU技術對獲得的1株菌株進行基因分型，為以后學校學生的隨訪、調查結核病的傳播奠定了基礎。ELISPOT實驗不受BCG接種的影響，具有較好的特異性；TST實驗受到BCG接種的顯著影響，一方面導致2種實驗較差的符合性，另一方面也說明了目前國內(nèi)基于TST≥15mm的