重癥肌無(wú)力患者外周血AIRE、Tfh細(xì)胞和Tfr細(xì)胞與病情嚴(yán)重性相關(guān)分析.pdf

1、重癥肌無(wú)力（myasthenia gravis，MG）是由乙酰膽堿受體抗體（acetylcholine receptor antibody，AChR-Ab）介導(dǎo)的，發(fā)生在神經(jīng)-肌肉接頭（neuro-muscular junction， NMJ）處的自身免疫疾病（autoimmune disease，AID）。MG發(fā)病可涉及多處的肌肉，并有細(xì)胞免疫、體液免疫及補(bǔ)體參與。多數(shù)研究認(rèn)為，發(fā)生于胸腺的異常免疫應(yīng)答與MG的發(fā)病有一定的相關(guān)性。但是

2、胸腺切除術(shù)后的MG患者病情反復(fù)發(fā)作，提示外周血中可能存在影響MG發(fā)病的關(guān)鍵因素。
　　自身免疫性調(diào)節(jié)因子（autoimmune regulator，AIRE）是一種轉(zhuǎn)錄因子，主要源自與胸腺髓質(zhì)的上皮細(xì)胞（medullary thymic epithelial cells, mTECs），其表達(dá)可能不僅與發(fā)生在胸腺內(nèi)的“陰性選擇”有關(guān)，而且與組織相關(guān)性抗原相關(guān)。有研究認(rèn)為，胸腺內(nèi)環(huán)境紊亂時(shí)，未成熟淋巴細(xì)胞不能通過(guò)“陰性選擇”完成自我

3、清除，從而進(jìn)入胸腺髓質(zhì)，易誘發(fā)交叉免疫反應(yīng)，導(dǎo)致自身免疫性疾病如MG的發(fā)生。此外，AIRE在胸腺外的表達(dá)也逐漸被發(fā)現(xiàn)并驗(yàn)證。有證據(jù)表明，某些來(lái)自腫瘤或外周組織的、目的是誘導(dǎo)特異抗原的調(diào)控 T細(xì)胞，可能受 AIRE調(diào)控，并參與組織特異的自身免疫耐受。因而在外周，AIRE可能也起到是基本的免疫調(diào)節(jié)功能。而這種調(diào)節(jié)可能發(fā)生在自身抗原遞呈的基因轉(zhuǎn)錄的過(guò)程中。胸腺外AIRE陽(yáng)性的細(xì)胞可與CD4+ T細(xì)胞相互作用并間接誘導(dǎo)免疫耐受。AIRE可能是通

4、過(guò)了某種機(jī)制來(lái)降低T淋巴細(xì)胞的功能并減少對(duì)調(diào)節(jié)性 T淋巴細(xì)胞的誘導(dǎo)。因此，研究 AIRE的調(diào)控作用機(jī)制顯得尤為重要。
　　濾泡輔助性T（T follicular helper，Tfh）細(xì)胞是一組CD4+ T淋巴細(xì)胞亞群，是向B淋巴細(xì)胞提供協(xié)助的輔助性T（helper T，Th）細(xì)胞群。Tfh細(xì)胞在促進(jìn)B細(xì)胞形成漿細(xì)胞的進(jìn)程中起到關(guān)鍵作用，并促進(jìn) B細(xì)胞產(chǎn)生較多的高親和性抗體。Tfh細(xì)胞定位于生發(fā)中心（germinal center

5、s，GCs），可通過(guò)趨化因子受體CXCR5輔助B細(xì)胞的遷移。CD4+ T細(xì)胞亞群的另一個(gè)關(guān)鍵細(xì)胞是濾泡調(diào)節(jié)性T（T follicular regulatory，Tfr）細(xì)胞，同樣定位于 GCs。Tfr細(xì)胞的主要作用是抑制 Tfh細(xì)胞功能并限制GCs的反應(yīng)。Tfr細(xì)胞可表達(dá)Foxp3+，具有Tfh和調(diào)節(jié)性T（T regulatoryT regulatory，Treg）細(xì)胞的雙重特點(diǎn)。Tfh和Tfr細(xì)胞被發(fā)現(xiàn)參與許多AIDs的病理生理過(guò)程，

6、并參與調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)。近期有研究表明，Tfh/Tfr細(xì)胞平衡紊亂可能與 MG病情相關(guān)，任何破壞這種平衡而產(chǎn)生的異?；驘o(wú)序Tfh/Tfr比值，都會(huì)導(dǎo)致免疫內(nèi)部的紊亂，其結(jié)果可能是過(guò)度抗體生產(chǎn)，從而導(dǎo)致 MG的發(fā)展。那么，在不同病情的MG患者，AIRE與 Tfh/Tfr細(xì)胞是否會(huì)出現(xiàn)不同的表達(dá)、治療前后上述變化是否會(huì)出現(xiàn)好轉(zhuǎn)，以及AIRE與Tfh/Tfr細(xì)胞的表達(dá)是否受病情嚴(yán)重程度等因素的影響呢？目前研究尚未見(jiàn)此類(lèi)報(bào)道。
　　本文旨在探

7、討AIRE、Tfh細(xì)胞和Tfr細(xì)胞在MG患者外周血MG的發(fā)病過(guò)程中所起到的作用。通過(guò)詳細(xì)的臨床資料進(jìn)行分組，對(duì)比不同分組間及治療前后的AIRE、Tfh/Tfr比值的變化；并進(jìn)一步研究AIRE的表達(dá)、Tfh/Tfr比值和MG的疾病嚴(yán)重程度之間的關(guān)聯(lián)性，為下一步深入研究MG發(fā)病的具體機(jī)制奠定部分理論基礎(chǔ)。
　　方法：
　　收集2015年12月-2016年4月第四軍醫(yī)大學(xué)唐都醫(yī)院收治的MG患者發(fā)病資料及外周血標(biāo)本。根據(jù)病變累及的范

8、圍，分為全身型重癥肌無(wú)力（generalized myasthenia gravis，GMG）組、眼肌型重癥肌無(wú)力（ocular myasthenia gravis，OMG）組、對(duì)照組；并在MG患者接受治療一個(gè)月后隨訪了10名患者（5名GMG患者和5名OMG患者）。AIRE陽(yáng)性細(xì)胞比例及Tfh/Tfr比值結(jié)果采用流式細(xì)胞術(shù)分析。
　　結(jié)果：
　　1、AIRE陽(yáng)性細(xì)胞比例在GMG組，與對(duì)照組比較明顯減低（P=0.010），而O

9、MG組和對(duì)照組間及GMG組和OMG組間均無(wú)顯著差異（P=0.068，P=0.196）。同時(shí)， Tfh/Tfr比值在GMG組比OMG組和對(duì)照均較高（P=0.036，P＜0.001），而OMG組高于對(duì)照組（P=0.005）。
　　2、AIRE陽(yáng)性細(xì)胞比例及 Tfh/Tfr比值在治療前后的數(shù)據(jù)比較均有明顯差異（P=0.001，P=0.008）。同時(shí)，AIRE陽(yáng)性細(xì)胞比例在GMG治療后結(jié)果與治療前GMG組比較有明顯上升（P=0.019），

10、與治療前 OMG組及對(duì)照組無(wú)明顯差異（P=0.128， P=0.998）；AIRE陽(yáng)性細(xì)胞比例在OMG治療后結(jié)果與治療前GMG組比較有明顯上升（P=0.041），與治療前OMG組及對(duì)照組無(wú)明顯差異（P=0.447，P=0.997）。Tfh/Tfr比值在GMG治療后結(jié)果與治療前GMG組比較有明顯下降（P=0.006），與對(duì)照組比較明顯上升（P=0.001），與治療前 OMG組比較無(wú)明顯差異（P=0.724）；Tfh/Tfr比值在OMG治療

11、后結(jié)果較治療前GMG組明顯下降（P=0.026），和治療前OMG組及對(duì)照組無(wú)明顯差異（P=0.994，P=0.052）。
　　3、AIRE陽(yáng)性細(xì)胞比例與反映病情嚴(yán)重程度的MGFA分型及QMG評(píng)分均呈明顯負(fù)相關(guān)（分別為P=0.019，P＜0.001）；而Tfh/Tfr比值與MGFA分型及QMG評(píng)分均呈明顯正相關(guān)（分別為P=0.002，P=0.015）。
　　結(jié)論：
　　AIRE、Tfh及Tfr細(xì)胞可能均參與了MG在外周的