PKA-CREB和p38MAPK-ATF2通路調(diào)控DNA polβ表達(dá)在食管癌中的作用.pdf

1、鄭州大學(xué)博士學(xué)位論文PKACREB和p38MAPKATF2通路調(diào)控DNApolβ表達(dá)在食管癌中的作用姓名：趙繼敏申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：病理學(xué)與病理生理學(xué)指導(dǎo)教師：董子明20090501鄭州大學(xué)2009年博士學(xué)位論文中文摘要(altemariol，AOH)(又稱鏈格孢酚)具有致癌性。研究顯示AOH能夠損傷DNA。一般而言，DNA損傷作為一種信號(hào)，將誘導(dǎo)細(xì)胞應(yīng)激反應(yīng)，激活DNA修復(fù)系統(tǒng)基因，使表達(dá)增高，以修復(fù)損傷。AOH能否激活一定的細(xì)胞

2、信號(hào)系統(tǒng)，上調(diào)poll3表達(dá)，尚不清楚。由于倫理學(xué)問(wèn)題使正常食管上皮取材困難，再加上正常食管上皮原代細(xì)胞擴(kuò)大培養(yǎng)的難度的限制，故本課題選取毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)中常用的NIH3T3細(xì)胞為靶細(xì)胞，擬從觀察AOH對(duì)NIH3T3細(xì)胞的毒性和DNA損傷作用及轉(zhuǎn)化能力入手，尋找AOH激活NIH3T3細(xì)胞中DNApolg表達(dá)增高的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。在此基礎(chǔ)上，進(jìn)一步研究食管癌EC9706細(xì)胞中這些信號(hào)通路的狀態(tài)，探討在食管癌細(xì)胞中這些信號(hào)通路與pol0表達(dá)的關(guān)系。

3、然后利用阻斷信號(hào)通路的方法，降低相關(guān)信號(hào)分子的活化、減少pol0表達(dá)，觀察對(duì)食管癌EC9706細(xì)胞生物學(xué)特性的影響和對(duì)化療藥物順鉑的敏感性的改變，為食管癌的治療提供新的思路。第一部分AOH對(duì)NIH3T3細(xì)胞生物學(xué)特性的影響和激活DNApolg表達(dá)的信號(hào)通路研究第一章AoH對(duì)NIH3T3細(xì)胞生物學(xué)特性的影響和誘導(dǎo)DNApolB表達(dá)方法1以10，20，100，200，500夥mol／L的AOH分別作用NIH3T3細(xì)胞24h和48h，M喊觀察

4、不同濃度的AOH對(duì)細(xì)胞增殖的影響；以10，20，100，200，500umol／L的AOH作用NIH3T3細(xì)胞4h，單細(xì)胞凝膠電泳實(shí)驗(yàn)觀察AOH對(duì)DNA損傷程度；以10，20，100，200，500umol／L的AOH作用NIH3T3細(xì)胞24h，流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測(cè)AOH對(duì)NIH3T3細(xì)胞周期的影響；以10，20，100，200，500肛mol／L的AOH作用NIH3T3細(xì)胞48h，將存活細(xì)胞傳代后，重復(fù)刺激48h，將細(xì)胞接種在六孔