超聲微泡介導(dǎo)端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的Fcy∷Fur基因治療卵巢癌的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、重慶醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文超聲微泡介導(dǎo)端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的Fcy∷Fur基因治療卵巢癌的實(shí)驗(yàn)研究姓名：朱元方申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：婦產(chǎn)科學(xué)指導(dǎo)教師：胡麗娜20090501重慶醫(yī)科大學(xué)博士研究生學(xué)位論文第一部分超聲微泡介導(dǎo)基因轉(zhuǎn)染卵巢癌細(xì)胞參數(shù)條件的篩選及可行性分析目的篩選超聲微泡介導(dǎo)基因轉(zhuǎn)染卵巢癌細(xì)胞的參數(shù)條件，并分析它作為基因轉(zhuǎn)移技術(shù)在卵巢癌細(xì)胞中的轉(zhuǎn)染效率，探討它用于卵巢癌基因轉(zhuǎn)移的可行性。方法(1)以O(shè)5、O75、1O、12

2、5、15、20W／cm2不同強(qiáng)度的超聲作用于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)的卵巢癌SKOV3細(xì)胞60s，通過(guò)臺(tái)盼蘭染色，篩選出對(duì)細(xì)胞活性無(wú)明顯抑制的超聲強(qiáng)度；(2)取自制脂質(zhì)微泡一瓶，向瓶?jī)?nèi)注入5mlPBS，用力搖勻至粉末完全溶解，檢測(cè)其原始濃度，將微泡稀釋5倍和lO倍，制備出不同濃度的微泡。然后將篩選出的聲強(qiáng)分別與不同濃度的微泡聯(lián)合作用于SKOV3細(xì)胞，臺(tái)盼蘭染色后，篩選出對(duì)細(xì)胞活性無(wú)明顯抑制的最適聲強(qiáng)和微泡濃度的組合；(3)將SKOV3細(xì)胞分成5組，①空

3、白組；②微泡組；⑧超聲組；④超聲微泡組；⑤脂質(zhì)體組：用上述不同基因轉(zhuǎn)移方式轉(zhuǎn)染pGL3一PromoterEGFP質(zhì)粒，通過(guò)觀察、計(jì)數(shù)表達(dá)綠色熒光蛋白細(xì)胞，比較各組轉(zhuǎn)染效率。結(jié)果(1)聲強(qiáng)05、O75w／cm2的超聲輻照，SKOV3細(xì)胞死亡率10％；(2)微泡原始濃度約為4x108／ml，其中08108／ml或04108／ml濃度的微泡聯(lián)合O5w／cm2超聲輻照，細(xì)胞死亡率10％；(3)超聲組和微泡組僅見(jiàn)很少的熒光細(xì)胞，兩者比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差