一種新型超聲造影劑JD-95介導(dǎo)血管內(nèi)皮生長因子基因治療心肌缺血的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、該研究著眼于將超聲造影劑從診斷技術(shù)拓展為用作載體、介導(dǎo)、輔助治療的新方法,并進(jìn)行了一系列有益的探索.首先構(gòu)建了血管內(nèi)皮生長因子與增強(qiáng)型綠色熒光蛋白基因共表達(dá)載體,實(shí)驗(yàn)了一種新型超聲造影劑JD-95經(jīng)靜脈實(shí)時(shí)造影的可行性.然后進(jìn)行了超聲造影劑JD-95介導(dǎo)血管內(nèi)皮生長因子基因治療心肌缺血的體外和體內(nèi)實(shí)驗(yàn),簡述如下. 第一部分一種新型超聲造影劑JD-95實(shí)時(shí)器官顯影的實(shí)驗(yàn)研究目的一種新型超聲造影劑JD-95的實(shí)時(shí)器官顯影效果及其安全性的檢測

2、.方法6只實(shí)驗(yàn)犬以微量注射泵靜脈滴注0.1ml/(kg·min)至0.3ml/(kg·min)不同劑量新型超聲造影劑JD-95,進(jìn)行實(shí)時(shí)心肌、肝臟、腎臟聲學(xué)造影,監(jiān)測心率、左室收縮功能及血?dú)庵笜?biāo).結(jié)論新型超聲造影劑JD-95可以獲得良好的心肌、肝臟、腎臟聲學(xué)造影效果,對實(shí)驗(yàn)犬無影響. 第二部分VEGF真核表達(dá)載體的構(gòu)建及在內(nèi)皮與心肌細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)目的 探討外源性VEGF165基因在內(nèi)皮細(xì)胞與心肌細(xì)胞內(nèi)表達(dá)的可行性.方法 構(gòu)建了血管內(nèi)皮生長

3、因子與增強(qiáng)型綠色熒光蛋白基因共表達(dá)載體pIRES2-EGFP-hVEGF165,以脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染內(nèi)皮細(xì)胞和心肌細(xì)胞,采用熒光顯微鏡檢測內(nèi)皮細(xì)胞與心肌細(xì)胞中綠色熒光蛋白的表達(dá),同時(shí)利用免疫組織化學(xué)方法檢測血管內(nèi)皮生長因子的表達(dá).結(jié)論 采用脂質(zhì)體法可以成功地將外源性VEGF165基因轉(zhuǎn)染到內(nèi)皮細(xì)胞與心肌細(xì)胞中,并進(jìn)行表達(dá),該研究為今后利用VEGF基因治療心肌缺血等疾病提供了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ).第三部分超聲破壞微泡造影劑介導(dǎo)VEGF基因轉(zhuǎn)染的體外實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

4、 研究超聲破壞微泡造影劑的方法提高脂質(zhì)體介導(dǎo)的VEGF基因在內(nèi)皮細(xì)胞中轉(zhuǎn)染率的可行性.方法 脂質(zhì)體介導(dǎo)VEGF基因轉(zhuǎn)染1小時(shí)后,將6孔板中的內(nèi)皮細(xì)胞每孔加入造影劑10μL或100μL或500μL,然后暴露在超聲下30秒、60秒、90秒.超聲探頭(Sonos 5500,S3,1.3MHz,MI1.0)置于水槽中,距離培養(yǎng)板1cm.2天后,用熒光顯微鏡觀察標(biāo)記基因EGFP的表達(dá).結(jié)論 超聲破壞微泡造影劑可以提高脂質(zhì)體介導(dǎo)的基因細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率,