轉(zhuǎn)膠蛋白抑制ARA54增強的雄激素受體轉(zhuǎn)錄功能和前列腺癌細胞的生長.pdf

1、背景與目的 前列腺癌是嚴重危害男性健康的常見疾病.雄激素及其受體的功能在前列腺癌的發(fā)生、發(fā)展中具有重要作用.聯(lián)合雄激素阻斷是目前治療晚期前列腺癌的主要手段.在治療后雄激素受體在癌組織內(nèi)仍然持續(xù)表達,前列腺癌最終向雄激素非依賴型轉(zhuǎn)變.研究雄激素受體在前列腺細胞內(nèi)信號調(diào)控的分子機理及其在腫瘤進展中所起的作用對我們認識和治療前列腺癌將產(chǎn)生重要影響. 雄激素的生理作用是通過雄激素受體而介導的.雄激素受體的轉(zhuǎn)錄功能需要共調(diào)節(jié)因子的

2、參與.目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了多種雄激素受體的相關(guān)蛋白和共調(diào)節(jié)因子.它們在前列腺癌發(fā)展中的病理生理功能正在得到闡明.ARA54是雄激素受體重要的共調(diào)節(jié)因子.它能夠激活雄激素受體的轉(zhuǎn)錄功能.ARA54也可以與其他雄激素受體共調(diào)節(jié)因子如SRC-1或ARA70產(chǎn)生協(xié)同作用,共同激活雄激素受體. 雄激素受體轉(zhuǎn)錄功能的調(diào)控機理目前還未完全闡明.尚不清楚雄激素受體的共調(diào)節(jié)因子本身是否需要相關(guān)蛋白的進一步協(xié)助和調(diào)控.本研究意在探索雄激素受體共調(diào)節(jié)因子A

3、RA54的相關(guān)蛋白及其對雄激素受體信號通路和前列腺癌進展所起的影響. 材料與方法 本研究采用CLONTECH酵母雙雜交系統(tǒng),以全長ARA54為誘餌從人類前列腺cDNA文庫中篩選出轉(zhuǎn)膠蛋白.克隆其全長cDNA后我們利用哺乳類雙雜交、體外GST沉淀和免疫共沉淀再次驗證了它與ARA54的相互作用.通過報告基因檢測和siRNA沉默技術(shù)我們研究了轉(zhuǎn)膠蛋白對ARA54及雄激素受體信號通路的影響.采用哺乳類雙雜交和免疫熒光染色我們進一

4、步探討了轉(zhuǎn)膠蛋白抑制雄激素受體轉(zhuǎn)錄功能的分子機理.利用基因轉(zhuǎn)染和siRNA沉默技術(shù)我們研究了轉(zhuǎn)膠蛋白對前列腺癌細胞株LNCaP生長以及前列腺特異性抗原表達的影響.最后我們采用免疫組化和組織芯片技術(shù)檢測了正常和癌變前列腺組織內(nèi)轉(zhuǎn)膠蛋白的表達水平. 結(jié)果 我們的研究從人類前列腺 cDNA 文庫中篩選出雄激素受體共調(diào)節(jié)因子ARA54的負調(diào)節(jié)相關(guān)蛋白一轉(zhuǎn)膠蛋白(transgelin).轉(zhuǎn)膠蛋白可以抑制由 ARA54增強的雄激素受

5、體轉(zhuǎn)錄功能.轉(zhuǎn)膠蛋白抑制雄激素受體轉(zhuǎn)錄功能必須通過 ARA54的介導.轉(zhuǎn)膠蛋白阻止 ARA54 二聚體的形成并阻斷了雄激素受體與ARA54的結(jié)合,最終導致雄激素受體在胞漿內(nèi)的滯留.前列腺癌細胞株 LNCaP 轉(zhuǎn)染轉(zhuǎn)膠蛋白后其前列腺特異性抗原表達和細胞生長均受抑制.由 siRNA 抑制內(nèi)源性轉(zhuǎn)膠蛋白表達則促進了LNCaP細胞生長及前列腺特異性抗原表達.人前列腺癌組織內(nèi)轉(zhuǎn)膠蛋白表達水平的降低進一步提示了它的腫瘤抑制功能. 結(jié)論

6、 1. 轉(zhuǎn)膠蛋白是ARA54相關(guān)的雄激素受體二級調(diào)控因子.2. 轉(zhuǎn)膠蛋白阻止 ARA54 二聚體的形成并阻斷了雄激素受體與ARA54的結(jié)合,最終導致雄激素受體在胞漿內(nèi)的滯留.3. 轉(zhuǎn)膠蛋白抑制由ARA54增強的雄激素受體轉(zhuǎn)錄功能和前列腺癌細胞的生長.4. 人類前列腺癌組織中轉(zhuǎn)膠蛋白表達水平顯著低于正常前列腺組織.5. 人類前列腺癌組織中ARA54表達水平顯著高于正常前列腺組織.6. ARA54具有直接正向調(diào)控雄激素受體和間接介導轉(zhuǎn)膠蛋