雷公藤內(nèi)酯醇對(duì)前列腺癌細(xì)胞雄激素受體的調(diào)控機(jī)制研究.pdf

1、劉彼得 雷公藤內(nèi)酯醇對(duì)前列腺癌細(xì)胞雄激素受體的調(diào)控機(jī)制研究雷公藤內(nèi)酯醇對(duì)前列腺癌細(xì)胞雄激素受體的調(diào)控機(jī)制研究研究生：劉彼得導(dǎo)師：顧曉，李巍中文摘要第一部分雷公藤內(nèi)酯醇在轉(zhuǎn)錄水平調(diào)節(jié)前列腺癌細(xì)胞內(nèi)雄激素受體表達(dá)的機(jī)制研究目的前列腺癌( p r o s t a t ec a n c e r , P C a ) 發(fā)病率在我國(guó)呈現(xiàn)快速上升態(tài)勢(shì)，雷公藤內(nèi)酯醇( t r i p t o l i d e ，T P ) 是中藥雷公藤的主要提取物之一，已

2、有研究示其對(duì)P C a 細(xì)胞有很強(qiáng)的生長(zhǎng)抑制及促凋亡作用。雄激素受體( a n d r o g e nr e c e p t o r ，A R ) 是P C a 治療的關(guān)鍵靶點(diǎn)，我們的前期研究表明T P 可下調(diào)P C a 細(xì)胞A R 的表達(dá)。故本研究將從轉(zhuǎn)錄水平探索T P 下調(diào)P C a 細(xì)胞A R 的機(jī)制。方法培養(yǎng)L N C a P 細(xì)胞并用T P 處理，采用熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)( q R T - P C R ) 和蛋白質(zhì)免疫印

3、跡( W e s t e r n b l o t ) 檢測(cè)T P 處理后L N C a P 細(xì)胞中A R 及其下游靶基因的m R N A和蛋白表達(dá)變化：采用R F 克隆法構(gòu)建系列p G L 3 ．A R 啟動(dòng)子報(bào)告基因載體并轉(zhuǎn)染至L N C a P細(xì)胞，檢測(cè)T P 在轉(zhuǎn)錄水平調(diào)節(jié)A R 的作用；使用N F —r ．B 抑制劑并采用W e s t e r n b l o t 檢測(cè)分析P 1 3 K ／A K T ／N F ．K B 通路是

4、否參與T P 對(duì)A R 的調(diào)控。數(shù)據(jù)采用G r a p h P a dP r i s m5 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果1 、T P 能呈劑量依賴性下調(diào)L N C a P 細(xì)胞A R 的m R N A 和蛋白的表達(dá)，同時(shí)下調(diào)A R靶基因P A R T 1 ( p r o s t a t ea n d r 。g e n ．r e g u l a t e dt r a n s c r i p t 1 ) 及前列腺特異性抗原( p r o s t

5、 a t es p e c i f i ca n t i g e n ，P S A ) 的表達(dá)。劉彼得 雷公藤內(nèi)酯醇對(duì)前列腺癌細(xì)胞雄激素受體的調(diào)控機(jī)制研究 34 、分別使用C a 2 + 螯合劑及C a 2 + 載體下調(diào)或上調(diào)L N C a P 細(xì)胞內(nèi)C a 2 + 濃度，結(jié)果示升高細(xì)胞內(nèi)C a 2 + 濃度能夠下調(diào)A R 的蛋白表達(dá)。表明T P 可能通過(guò)上調(diào)胞內(nèi)C a 2 + 濃度進(jìn)而激耋罷印m 活性來(lái)下調(diào)A R 的表達(dá)。 ＼刪 結(jié)論

6、 Y 3 1 Z 譬b ，uT P 能夠在轉(zhuǎn)錄后水平下調(diào)L N C a P 細(xì)胞內(nèi)A R 的表達(dá)，其機(jī)制可能為：T P 能夠通過(guò)上調(diào)胞內(nèi)C a 2 + 濃度并激活c a l p a i n 活性從而起到下調(diào)A R 蛋白表達(dá)的作用。第三部分c a l p a i n 一1 ，c a l p a i n 一2 ，c a l p a s t a t i n ，c a l m o d u l i n 及A R蛋白在前列腺癌組織中的表達(dá)目的C a

7、 l p a i n 、c a l p a s t a t i n 及鈣調(diào)蛋白( c a l m o d u l i n ，C a M ) 均為鈣相關(guān)蛋白且三者均與A R 的蛋白穩(wěn)定性相關(guān)。本部分研究檢測(cè)前列腺組織中以上鈣相關(guān)蛋白和A R 蛋白的表達(dá)，并分析各蛋白表達(dá)與P C a 臨床特征的相關(guān)性，旨在探討鈣相關(guān)蛋白與P C a 發(fā)生和發(fā)展的關(guān)系。方法收集2 0 1 3 年1 月一2 0 1 5 年6 月?lián)P州大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院泌尿外科P C

8、 a 根治標(biāo)本及良性前列腺增生( b e n i g np r o s t a t i ch y p e r p l a s i a ，B P H ) 電切標(biāo)本各2 5 例，采用免疫組織化學(xué)法( i m m u n o h i s t o c h e m i s t r y ，I H C ) 檢測(cè)組織中c a l p a i n ．1 ，c a p i a n 一2 ，c a l p a s t a t i n ，C a M 及A R

9、的表達(dá)。使用I m a g e —p r o ．p l u s6 軟件檢測(cè)組織腺體染色區(qū)光密度值，并應(yīng)用S P S S l 7 ．0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果1 、2 5 例B P H 及2 5 例P C a 組織中均有c a l p a i n —l 、c a l p a i n ·2 、c a l p a s t a t i n 、C a M 及A R的表達(dá)，且與B P H 組織相比，P C a 組織中五種蛋白的表達(dá)均顯著

10、升高( 尸< 0 ．0 0 1 ) 。2 、在B P H 及P C a 組織中僅c a l p a s p a t i n 與C a M 表達(dá)間有相關(guān)性。3 、R O C 曲線分析表明c a l p a i n ·l 、c a l p a i n - 2 、c a l p a s t a t i n 、C a M 及A R 均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，曲線下面積分別為0 ．8 1 1 2 、0 ．9 8 0 8 、0 ．9 8 2