板栗多糖及其硒酸化衍生物的結(jié)構(gòu)與抗腫瘤活性研究.pdf

1、惡性腫瘤是嚴(yán)重威脅人類健康的一類常見疾病。目前，臨床使用的化療藥物在治療腫瘤的同時(shí)，會產(chǎn)生嚴(yán)重的毒副作用，這大大降低了病人的生存質(zhì)量。篩選高效低毒的抗腫瘤藥物在腫瘤的治療上有著廣闊的前景。多糖是自然界中含量豐富的生物大分子，具有抗腫瘤、抗氧化、增強(qiáng)免疫等多種生物活性。多糖與放療、化療聯(lián)合應(yīng)用具有協(xié)同作用，在增強(qiáng)抗腫瘤效果的同時(shí)，還可降低放療或化療的毒副作用，從而提高患者的遠(yuǎn)期生存率。硒是人體所必須的微量元素，具有抗腫瘤、增強(qiáng)免疫、抗氧化

2、等生物功能，對多糖進(jìn)行硒酸化修飾可顯著提高多糖的抗腫瘤活性。因此，尋找具有抗腫瘤活性的硒酸化多糖類物質(zhì)對于腫瘤的治療具有重要的意義。板栗為殼斗科栗屬植物的果實(shí)。中醫(yī)認(rèn)為，板栗具有益氣補(bǔ)脾、健腸胃、補(bǔ)腎、強(qiáng)筋、活血、止血、清熱解毒、止瀉治咳等功效。板栗中含有豐富的淀粉、多糖、蛋白質(zhì)、維生素、微量元素等，營養(yǎng)價(jià)值高?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，板栗多糖具有抗氧化、抗腫瘤、抗凝血和升高白細(xì)胞等多種生物活性。因此，本文首先從采自河北省遷西縣的板栗種仁中

3、提取多糖，經(jīng)分離純化制備均一的多糖組分，對其理化性質(zhì)、單糖組成、純度及分子量、結(jié)構(gòu)等進(jìn)行解析，同時(shí)對多糖進(jìn)行硒酸化修飾，并對硒酸化多糖的結(jié)構(gòu)進(jìn)行表征；其次，對板栗多糖及其硒酸化衍生物的抗腫瘤活性及誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的作用機(jī)制進(jìn)行研究。研究結(jié)果將為板栗多糖及其硒酸化衍生物在抗腫瘤藥物領(lǐng)域的研究和開發(fā)提供理論依據(jù)。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴板栗種仁粉末分別經(jīng)冷水和熱水提取得到冷水提多糖CP和熱水提多糖HP，得率分別為8.6％和7.1%

4、。采用離子交換色譜法和凝膠滲透色譜法對多糖CP和HP進(jìn)行分離純化，主要得到3種多糖組分CP0-1、CP0-2和HP0-1。理化性質(zhì)測定結(jié)果表明，CP0-1、CP0-2和HP0-1的總糖含量分別為95.1%、97.1%和93.5%；蛋白質(zhì)含量分別為0.50%、0.80%和0.17%；不含有糖醛酸和硫酸基團(tuán)。高效凝膠滲透色譜法測得CP0-1和HP0-1均為單一對稱的色譜峰，分子量分別為2.0×103 kDa和1.7 kDa，質(zhì)譜法測得CP0

5、-2的分子量為828 Da。高效液相色譜法測得CP0-1和CP0-2由葡萄糖組成，HP0-1由葡萄糖和半乳糖組成。經(jīng)紅外光譜和核磁共振波譜分析表明，CP0-1為1,6-連接的線性葡聚糖；CP0-2為1,6-連接的葡萄糖五糖；HP0-1為1,4-連接的半乳葡聚糖。采用HNO3-Na2SeO3法對CP0-1進(jìn)行硒酸化修飾，得硒酸化多糖多糖CP0-1的sCP0-1，產(chǎn)率約為26.3%。電感耦合等離子體發(fā)射光譜法(ICP-OES)測得多糖CP0

6、-1的硒含量為573.9μg/g，核磁共振波譜法(DEPT135o)發(fā)現(xiàn)硒酸化修飾主要發(fā)生在多糖的C-1，C-2，C-3和C-4位上。⑵體外MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示多糖CP0-1和sCP0-1對宮頸癌HeLa細(xì)胞和乳腺癌MCF-7細(xì)胞的增殖具有抑制作用，并呈濃度和時(shí)間依賴性，多糖硒酸化修飾后對腫瘤細(xì)胞的抑制作用明顯增強(qiáng)。Annexin V-FITC/PI雙染法檢測發(fā)現(xiàn)多糖CP0-1和sCP0-1可誘導(dǎo)HeLa細(xì)胞發(fā)生凋亡，熒光顯微鏡觀察到He