糖尿病大鼠心臟、腎臟微血管內(nèi)微血栓形成機制及意義探討.pdf

1、目的: 本研究通過建立2型糖尿病大鼠模型，觀察糖尿病大鼠心腎微血管內(nèi)微血栓形成、心腎臟器病理改變及功能的變化，檢測糖尿病大鼠心臟和腎臟上的fgl2凝血酶原酶的表達(dá)，旨在以糖尿病大鼠模型為平臺模擬人類2型糖尿病，分析fgl2凝血酶原酶與微血栓形成的關(guān)系，探討糖尿病微血管內(nèi)微血栓形成的機制及意義。 方法: 68只SD大鼠隨機分為正常對照組（NC組）和糖尿病組（DM組）。建立2型糖尿病大鼠模型，分別于實驗第19周、第23周、第28周分

2、批處死大鼠。測定射血分?jǐn)?shù)（EF）及心率（HR）、等容舒張期左室內(nèi)壓下降的最大速率（-dp/dtmax）和等容收縮期左室內(nèi)壓上升的最大速率（+dp/dtmax）、心臟重量/體重（HW/BW）；HE、MASSON、纖維素染色觀察不同病程DM組大鼠及NC組大鼠的心臟病理改變，行纖維素染色檢測大鼠心臟上微血管內(nèi)血栓形成，隨機計數(shù)100根直徑≤100μm的微血管中微血栓形成的血管（陽性血管）數(shù)；以逆轉(zhuǎn)錄PCR方法、免疫組織化學(xué)方法測定fgl2在D

3、M大鼠心臟組織細(xì)胞上的表達(dá)；并將fgl2表達(dá)的平均光密度值與陽性血管數(shù)進(jìn)行相關(guān)性分析；同時測定24小時尿蛋白排泄量、血肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)，腎重/體重(KW/BW)。HE、PAS、MASSON染色觀察不同病程DM組大鼠及NC組大鼠的腎臟病理改變，行 MASSON染色檢測大鼠腎臟上微血管內(nèi)血栓形成，計算單位腎小球面積內(nèi)微血栓所占陽性面積比例；以逆轉(zhuǎn)錄PCR方法、免疫組織化學(xué)方法測定fgl2在DM組大鼠腎臟組織細(xì)胞上的表達(dá)；并將

4、fgl2表達(dá)的平均光密度值與單位腎小球內(nèi)微血栓陽性面積比例進(jìn)行相關(guān)性分析。 結(jié)果: ①高糖高脂飲食加低劑量STZ使大鼠及血糖升高，并出現(xiàn)胰島素抵抗。繼續(xù)以高糖高脂飲食喂養(yǎng)后，模型成功大鼠逐漸出現(xiàn)±dp/dtmax和射血分?jǐn)?shù)、心率下降，心臟重量/體重升高；血肌酐、尿素氮、腎重/體重、24小時尿蛋白排泄量升高等特征。 ②不同周齡的DM組大鼠心臟上fgl2的表達(dá)量均高于同齡NC組，fgl2在DM大鼠的心臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞

5、中高表達(dá)。心臟病理結(jié)果顯示：與NC組相比，DM組大鼠心肌間質(zhì)纖維化、凝固性壞死等病變明顯，并可見微血栓的形成，纖維素染色證實該血栓是以纖維素沉積為主要成分的原位血栓。DM組大鼠陽性血管數(shù)顯著高于NC組，且與fgl2蛋白表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.603，P<0.01)。 ③DM組大鼠Fgl2在腎臟的表達(dá)量較對照組明顯增多,主要表達(dá)在DM大鼠的腎小球毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞及腎間質(zhì)微血管內(nèi)皮細(xì)胞。病理學(xué)檢查顯示糖尿病大鼠腎小球肥大、系膜擴張、腎

6、小球基底膜增厚、細(xì)胞外基質(zhì)增生、PAS陽性物質(zhì)沉積增多、腎小球毛細(xì)血管微血栓形成，且微血栓陽性面積比例明顯高于NC組。分析提示fgl2的蛋白表達(dá)量與單位腎小球內(nèi)微血栓陽性面積比例呈正相關(guān)(r=0.543，P<0.01)關(guān)系。 結(jié)論: ①高糖高脂飲食加小劑量的STZ誘導(dǎo)，成功建立2型糖尿病大鼠模型，并觀察到糖尿病大鼠心臟、腎臟微血管內(nèi)微血栓的形成，為研究糖尿病微血管并發(fā)癥提供了理想的實驗平臺。 ②首次證實fgl2m