ERα特異性抑制劑對小鼠植入前胚體外發(fā)育和合子基因組激活的影響.pdf

1、目的：
　　觀察雌激素受體（estrogen receptor，ER）抑制劑（ICI182780）、ERα特異性抑制劑（MPP）和ERβ特異性抑制劑（PHTPP）以及ERα特異性抗體對小鼠植入前胚體外發(fā)育的影響；探討 ERα特異性抑制劑（MPP）對小鼠合子基因組激活（zygotic genome activation，ZGA）中四個相關(guān)基因，以及ERα目的基因c-Myc的表達影響，為進一步闡明ERα在小鼠植入前胚發(fā)育中的作用奠定基

2、礎(chǔ)。
　　方法：
　　1、分別取KM雌性小鼠與KM雄性小鼠（♀KM×♂KM），以及B6C3F1雌性小鼠與KM雄性小鼠（♀B6C3F1×♂KM）交配所得的1-細胞胚和2-細胞胚，觀察其在M16培養(yǎng)液、不同濃度的ICI182780培養(yǎng)液、不同濃度的MPP培養(yǎng)液、不同濃度的PHTPP培養(yǎng)液以及不同濃度的ERα特異性抗體培養(yǎng)液中體外發(fā)育的情況；
　　2、收集KM小鼠1-細胞胚，分別置于M16和含MPP（25μΜ）的培養(yǎng)液中培養(yǎng)

3、，獲取體外發(fā)育的2-細胞胚：
　?、偶す夤簿劢箳呙栾@微鏡觀察胚內(nèi)核ERα定位和表達情況；
　?、?Western-blot檢測ERα、c-MYC蛋白水平；
　　⑶ Realtime-PCR測定ERα、c-Myc、Jmjd2c、MuERV-L、Zscan4d、Hsp70.1和eIF1A mRNA水平。
　　結(jié)果：
　　1、ER抑制劑（ICI182780）、ERα特異性抑制劑（MPP）和ERα特異性抗體使小鼠1

4、-細胞胚和2-細胞胚體外發(fā)育受阻于2-細胞階段，很少能過渡至4-細胞胚；而ERβ特異性抑制劑（PHTPP）無上述作用；
　　2、激光共聚焦掃描顯微鏡顯示，MPP組中，核ERα熒光相對強度低于M16組（P<0.01）；
　　3、Western blot檢測表明，MPP組和M16組中，ERα、c-MYC蛋白表達水平?jīng)]有明顯差異，不具有統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；
　　4、Realtime-PCR結(jié)果提示，MPP組中，MuE

5、RV-L mRNA水平明顯低于M16組（P<0.01），而其他基因mRNA水平與M16組比較，沒有明顯差別（P>0.05）。
　　結(jié)論：
　　ER抑制劑（ICI182780）、ERα特異性抑制劑（MPP）和ERα特異性抗體對小鼠植入前胚2-細胞至4-細胞體外發(fā)育過渡具有抑制作用，進而使植入前胚無法發(fā)育至囊胚階段，而ERβ特異性抑制劑（PHTPP）對其抑制效果不明顯，提示ERα在小鼠植入前胚2-細胞至4-細胞體外發(fā)育過渡中的作