右美托咪啶對電點(diǎn)燃癲癇大鼠海馬組織中SOD、MDA含量及iNOS表達(dá)的影響.pdf

1、目的:癲癇(epilepsy)是神經(jīng)科最常見慢性疾病之一，既有原發(fā)性的，也有繼發(fā)性的，臨床上以腦部疾病后癲癇常見。癲癇在幼年時(shí)期即有較高的的發(fā)病率，世界上近1％的人口遭受著癲癇這一慢性疾病的困擾，在目前的醫(yī)療水平下仍有近30％的癲癇患者經(jīng)過藥物治療后不能得到理想的控制。癲癇的病理基礎(chǔ)為腦部神經(jīng)元的異常放電。目前對于癲癇的腦損傷機(jī)制有以下幾方面:細(xì)胞內(nèi)鈣超載、氧化應(yīng)激、興奮性氨基酸中毒、炎癥反應(yīng)及凋亡等多個(gè)方面，并且它們之間相互影響，互為

2、因果，影響腦部神經(jīng)元的功能。因此抗癲癇藥物的選用及研發(fā)也成為近年來研究的熱點(diǎn)，同時(shí)針對抗氧化應(yīng)激成為眾多抗癲癇藥物研究的重要的一方面。
　　本研究以雄性Wistar大鼠為實(shí)驗(yàn)動物，應(yīng)用杏仁基底外側(cè)核電點(diǎn)燃法建立大鼠慢性癲癇模型。依據(jù)Racine分級，記錄觀察大鼠癲癇發(fā)作的嚴(yán)重程度，并用右美托咪啶進(jìn)行腹腔注射加以干預(yù)，通過Morris水迷宮檢測癲癇大鼠及右美托咪啶干預(yù)大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的改變，檢測海馬組織中超氧化物歧化酶(SOD)、丙

3、二醛(MDA)含量高低情況及運(yùn)用WesternBlot方法檢測誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)蛋白表達(dá)變化。觀察右美托咪啶是否通過抗氧化作用對癲癇大鼠認(rèn)知有改善作用，并且同時(shí)對右美托咪啶的抗癲癇作用機(jī)制進(jìn)行研究。
　　方法:清潔級健康成年雄性Wistar大鼠有43只，隨機(jī)分組:正常對照組（NC組）8只，未給予植入電極，每天抓取一次。假手術(shù)組(SH組)8只，給予杏仁基底外側(cè)核植入電極，未行電刺激;慢性電點(diǎn)燃癲癇組（EP組）9只，慢性電

4、點(diǎn)燃程序刺激予以點(diǎn)燃后刺激;右美托咪啶低劑量組（LD組）9只，慢性電點(diǎn)燃程序刺激+點(diǎn)燃后刺激+腹腔注射右美托咪啶(50μg/kg);右美托咪啶高劑量組（HD組）9只，慢性電點(diǎn)燃程序刺激+點(diǎn)燃后刺激+右美托咪啶(100μg/kg)腹腔注射。EP組、HD組、LD組測定后放電閾值后將符合點(diǎn)燃成功后大鼠予以慢性電點(diǎn)燃刺激，點(diǎn)燃成功后予以每日一次點(diǎn)燃后刺激，其中LD組/HD組于點(diǎn)燃后每日電刺激前5分鐘給予右美托咪啶50μg/kg/100μg/kg

5、腹腔內(nèi)注射，一周后將各組大鼠行Morris水迷宮試驗(yàn)，檢測各組大鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力，記錄其逃避潛伏期，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后將五組大鼠斷頭處死，取海馬組織，運(yùn)用WesternBlot檢測海馬腦組織中誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)蛋白表達(dá)及制備10％海馬腦組織勻漿并采用比色法檢測海馬組織中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的含量變化。
　　結(jié)果:
　　1給予慢性電點(diǎn)燃程序刺激后，EP組達(dá)到點(diǎn)燃的大鼠8只，HD、LD組達(dá)到點(diǎn)燃的大鼠

6、8只，點(diǎn)燃成功后繼續(xù)給予杏仁基底外側(cè)核電刺激，HD組給予右美托咪定后癲癇發(fā)作等級較EP組明顯降低，LD組發(fā)作等級較EP組無明顯變化。SH組和NC組均無癲癇發(fā)作。
　　2Morris水迷宮檢測結(jié)果，對各組大鼠航行結(jié)果統(tǒng)計(jì)均值，記錄平均逃避潛伏期，各組之間進(jìn)行比較發(fā)現(xiàn):定位航行第一天:EP、LD、HD組逃避潛伏期均較NC組延長，但統(tǒng)計(jì)學(xué)無明顯差異，NC組和SH組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。第二天與第一天相比，各組逃避潛伏期均值均明顯

7、縮短，但EP、LD、HD組均較NC組延長，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，NC組和SH組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)，LD、HD組均較EP組縮短，HD組與EP組有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，LD組與EP組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。第三天測試結(jié)果與第二天相比各組逃避潛伏期均值均明顯縮短，EP、LD、HD組均較NC組延長，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，NC組和SH組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)，LD、HD組均較EP組縮短，HD組與EP組有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜

8、0.05)，LD組與EP組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。第四天各組逃避潛伏期均較第三天縮短。各組比較結(jié)果同第三天。
　　3大鼠海馬腦組織勻漿MDA含量變化EP組(5.002±1.515nmol/mgprot)、LD組(4.757±0.939nmol/mgprot)MDA含量明顯升高，與NC組(2.078±0.593nmol/mgprot)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);HD組(2.3180±0.756nmol/mgprot)與NC組相比較

9、無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）;NC組、SH組(2.101±0.575nmol/mgprot)中MDA含量相比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）;HD組MDA含量與EP組比較減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　4大鼠海馬腦組織勻漿SOD活力變EP組(19.2012±4.33U/mgprot)、LD組(20.71±3.88U/mgprot)SOD活力明顯減弱，與NC組(33.16±6.13U/mgprot)比較，差異有統(tǒng)計(jì)

10、學(xué)意義(P＜0.05);HD組(27.27±6.99U/mgprot)與NC組相比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05);NC組、SH組(33.15±3.58U/mgprot)中SOD活力相比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);HD組SOD活力增強(qiáng)，與EP組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　5大鼠海馬Westernblot結(jié)果EP組（0.658±0.215）、LD組（0.644±0.220）海馬腦組織中一氧化氮合酶(iNOS)

11、蛋白表達(dá)較NC組（0.381±0.163）、SH組(0.385±0.156)明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05);NC組、SH組海馬腦組織中一氧化氮合酶(iNOS)蛋白表達(dá)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05);HD組（0.419±0.134）海馬腦組織中一氧化氮合酶(iNOS)蛋白表達(dá)較EP組明顯降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　1成功建立杏仁基底外側(cè)核電點(diǎn)燃慢性癲癇模型，癲癇大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力下降，