MicroRNA-376c靶向調(diào)控TGFA抑制骨肉瘤細(xì)胞增殖與轉(zhuǎn)移的研究.pdf

1、目的:
　　為miR-376c可以通過靶向調(diào)控TGFA抑制骨肉瘤細(xì)胞增殖與轉(zhuǎn)移提供證據(jù)。
　　方法:
　　1、臨床選取13例骨肉瘤組織標(biāo)本及配對(duì)正常骨骼肌組織標(biāo)本;選取人正常成骨細(xì)胞為對(duì)照，選取三株骨肉瘤細(xì)胞作為實(shí)驗(yàn)組，QPCR技術(shù)檢測(cè)骨肉瘤組織與細(xì)胞中miR-376c與TGFAmRNA的表達(dá)差異。
　　2、利用miR-376c模擬物轉(zhuǎn)染骨肉瘤Saos-2細(xì)胞，Westernblot檢測(cè)TGFA和EGFR的表達(dá)，

2、接著過表達(dá)TGFA，回復(fù)miR-376c抑制TGFA和EGFR表達(dá)的效應(yīng)。
　　3、利用雙熒光素酶報(bào)告基因進(jìn)一步驗(yàn)證miR-376c對(duì)TGFA的靶向調(diào)控作用。
　　4、構(gòu)建miR-376c慢病毒載體，感染Saos-2細(xì)胞，用CCK8和Transwell方法檢測(cè)miR-376c對(duì)Saos-2細(xì)胞增殖和侵襲能力的影響，接著過表達(dá)TGFA，回復(fù)miR-376c對(duì)Saos-2細(xì)胞的生物學(xué)效應(yīng)。
　　結(jié)果:
　　1、組織水

3、平QPCR結(jié)果顯示，miR-376c在骨肉瘤組織中特異低表達(dá)，TGFA在骨肉瘤組織中特異高表達(dá)，且兩者具有很好的負(fù)相關(guān)性;細(xì)胞水平QPCR結(jié)果顯示，miR-376c在骨肉瘤細(xì)胞中特異低表達(dá)，TGFA在骨肉瘤細(xì)胞中特異高表達(dá)，與組織水平表達(dá)趨勢(shì)一致。
　　2、miR-376c模擬物轉(zhuǎn)染Saos-2細(xì)胞，miR-376c過表達(dá)，同時(shí)TGFA和EGFR表達(dá)受到顯著抑制;當(dāng)TGFA過表達(dá)后，可回復(fù)miR-376c抑制效應(yīng)。
　　3、

4、成功構(gòu)建miR-376c慢病毒載體，感染Saos-2細(xì)胞，GFP熒光圖片顯示，感染效率在8()上。細(xì)胞功能學(xué)結(jié)果顯示miR-376c過表達(dá)可顯著抑制Saos-2細(xì)胞增殖能力和侵襲能力，當(dāng)TGFA過表達(dá)后，可回復(fù)miR-376c對(duì)Saos-2細(xì)胞的功能學(xué)效應(yīng)。
　　結(jié)論:
　　1、miR-376c與TGFA表達(dá)在骨肉瘤組織和細(xì)胞水平均成負(fù)相關(guān)關(guān)系。
　　2、miR-376c通過靶向結(jié)合TGFA3'-UTR上預(yù)測(cè)的miR-