柿果ACC合成酶反義基因的遺傳轉(zhuǎn)化.pdf

1、本研究以上西早生柿組培苗葉片為外植體，通過對離體葉片再生條件、抗生素篩選條件和根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)上西早生柿遺傳轉(zhuǎn)化條件的優(yōu)化，建立了高頻再生體系和遺傳轉(zhuǎn)化體系，并將ACC合成酶基因?qū)肷衔髟缟两M培苗中。以期通過轉(zhuǎn)基因的方法抑制ACC合成酶的表達(dá)，提高躍變型果實的耐貯性能。主要取得以下研究結(jié)果： 1.建立了高效穩(wěn)定的上西早生柿組培苗葉片再生體系通過對影響上西早生柿葉片再生的基礎(chǔ)培養(yǎng)基、激素濃度配比、暗培養(yǎng)時間和葉片部位的研究，得出含

2、氮量低的MS(1/2N)培養(yǎng)基適合上西早生柿的葉片再生，暗培養(yǎng)10天能提高上西早生柿葉片的再生頻率，葉片基部的再生能力比葉尖和葉中間部位強，4.0mg/L的ZT能誘導(dǎo)上西早生葉片高效再生。在此條件下，上西早生柿的葉片分化頻率達(dá)97.8﹪，平均每葉片產(chǎn)生5.6個不定芽。 2.研究了抗生素對不定芽再生和生長的影響，確定了適宜選擇壓。通過上西早生柿組培苗對抗生素的敏感性試驗，確定的選擇壓為：葉片分化培養(yǎng)過程中，用200mg/L頭孢霉素

3、作為脫菌培養(yǎng)的抑菌濃度，20mg/L壯觀霉素作為對抗性不定芽的篩選濃度；在抗性苗生長過程中，用100me/L頭孢霉素和10mg/L壯觀霉素進一步篩選轉(zhuǎn)化抗性苗。 3.建立了高效遺傳轉(zhuǎn)化體系，并將ACC合成酶基因?qū)肷衔髟缟林?。通過對葉片預(yù)培養(yǎng)時間、浸染時間、浸染時菌液濃度、AS濃度，共培養(yǎng)時間等遺傳轉(zhuǎn)化影響因素的研究，建立的上西早生柿遺傳轉(zhuǎn)化體系為：葉片預(yù)培養(yǎng)3天，用OD600為0.3的菌液浸染10分鐘，共培養(yǎng)4天。獲得的上西