豐富環(huán)境對腦缺血再灌注損傷后腦血流和血管新生的影響.pdf

1、本文從以下幾個部分展開論述：
　　第一部分 豐富環(huán)境干預(yù)對腦梗塞大鼠腦血流恢復(fù)和腦血管新生的影響
　　目的:既往研究證實(shí)，缺血性腦梗塞后的血流恢復(fù)及血管再生對腦功能的改善有重要作用。本實(shí)驗(yàn)擬探討豐富環(huán)境干預(yù)是否能改善腦卒中后血管新生和腦血流的改善。
　　方法:將SD大鼠隨機(jī)分為3組:假手術(shù)組、豐富環(huán)境組和標(biāo)準(zhǔn)環(huán)境組，并進(jìn)行大腦中動脈梗塞手術(shù)，其中假手術(shù)組除不堵塞血管這一步驟，其余步驟與手術(shù)組相同。在缺血前和缺血1小時分

2、別運(yùn)用激光散斑技術(shù)檢測各組大鼠大腦中動脈供血區(qū)皮層的相對血流速度，然后將手術(shù)后的大鼠分別放入相應(yīng)的環(huán)境中飼養(yǎng)4周，4周后再次檢測同一區(qū)域皮層相對血流速度。另有大鼠干預(yù)4周后經(jīng)大鼠尾靜脈注入異硫氰酸熒光素右旋糖苷(Fluorescein Isothiocyanate dextran，F(xiàn)ITC-dextran)，5分鐘后斷頭取腦，固定后切片，通過激光共聚焦掃描顯微鏡檢測缺血干預(yù)后的血管密度。同時，運(yùn)用免疫印記(Westernblot)技術(shù)檢

3、測缺血側(cè)大腦皮層血管內(nèi)皮生長因子(VascularEndothelial Growth Factor， VEGF)的表達(dá)。
　　結(jié)果:與缺血前比較，豐富環(huán)境組和標(biāo)準(zhǔn)環(huán)境組缺血側(cè)皮層的相對血流速度在缺血1小時后明顯下降(P＜0.01)，假手術(shù)組無明顯變化。干預(yù)4周后，與標(biāo)準(zhǔn)環(huán)境組相比，豐富環(huán)境組的缺血側(cè)皮層血流速度明顯增加(P＜0.05)。另外，豐富環(huán)境干預(yù)4周后的大鼠缺血側(cè)皮層的血管密度明顯大于標(biāo)準(zhǔn)環(huán)境組，VEGF蛋白表達(dá)也明顯高

4、于標(biāo)準(zhǔn)環(huán)境組。
　　結(jié)論:豐富環(huán)境可以增加缺血后大鼠的缺血側(cè)皮層血流，血流的增加可能與豐富環(huán)境促進(jìn)了VEGF的表達(dá)從而增強(qiáng)血管再生有關(guān)。
　　第二部分 豐富環(huán)境干預(yù)后的大鼠血清對氧糖剝奪后腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖作用的影響
　　目的:血管新生是成人腦缺血后血管生成的最主要方式，也是現(xiàn)如今研究的主要方向;腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞是主要的腦血管組成成分，對腦缺血后的血管新生及其重要。本項(xiàng)研究將探討豐富環(huán)境干預(yù)后大鼠的血清對氧糖剝奪后腦

5、微血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖作用。
　　方法:豐富環(huán)境及標(biāo)準(zhǔn)環(huán)境干預(yù)同前，干預(yù)后大鼠心臟采血，離心后取上清，過濾后備用。培養(yǎng)腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞，實(shí)施氧糖剝奪實(shí)驗(yàn)以復(fù)制體外腦缺血模型。而后進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，用10％、20％和40％濃度的不同干預(yù)血清分別培養(yǎng)氧糖剝奪后的腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞，用CCK-8測定其增殖，摸索最適濃度。最后，用最適濃度血清多次重復(fù)培養(yǎng)氧糖剝奪后的腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞，進(jìn)一步探討豐富環(huán)境干預(yù)后大鼠的血清對氧糖剝奪后的腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞的

6、增殖作用。
　　結(jié)果:10％濃度的干預(yù)血清培養(yǎng)氧糖剝奪后的腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞，其CCK-8檢測的OD值明顯大于20％和40％濃度的干預(yù)血清(P＜0.01);10％濃度豐富環(huán)境干預(yù)的大鼠血清培養(yǎng)氧糖剝奪后的腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞，其CCK-8檢測的OD值明顯大于標(biāo)準(zhǔn)環(huán)境干預(yù)的大鼠血清的CCK-8值(P＜0.01)。
　　結(jié)論:10％濃度的干預(yù)血清對氧糖剝奪后的腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞的促增殖作用最明顯;10％濃度豐富環(huán)境干預(yù)的大鼠血清對氧糖剝