TRAIL基因重組卡介苗的構建及對膀胱腫瘤殺傷作用的研究.pdf

1、浙江大學博士學位論文TRAIL基因重組卡介苗的構建及對膀胱腫瘤殺傷作用的研究姓名：陳善聞申請學位級別：博士專業(yè)：外科學（泌尿外科學）指導教師：沈周俊20070501浙扛大學博士學位論文—摘要“TRAIL基因重組卡介苗的構建及對膀胱腫瘤殺傷作用的研究TRAIL基因重組卡介苗的構建及對膀胱腫瘤殺傷作用的研究浙江大學醫(yī)學院外科學(泌尿外科)博士研究生陳善聞導師沈周俊教授中文摘要一、研究目的獲得高效、穩(wěn)定表達腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體(TNF

2、relatedapoptosisinducingligandTRAII，)蛋白的重組卡介苗(BacilleCalmetteCuCrin，BCG)株；成功構建膀胱腫瘤小鼠模型；證實重組BCG(rBCGTRAIL)比常規(guī)BCG等具有更強的抗膀胱腫瘤特性，毒副作用小。二、主要研究內容1BCG穿梭表達載體的構建與鑒定：分別采用RTPCR和PCR獲取TRAIL和A985B信號肽基因序列后，利用DNA重組技術將以上兩個片段先后插入穿梭質粒pMV26

3、1的HSP60啟動子下游，構建分泌型BCG穿梭表達載體pMV261A985BTRAIL并轉化大腸桿菌、抽提和純化，對pMV261A985BTRAIL進行酶切、PCR擴增及DNA測序鑒定。2rBCGTRAIL的構建：利用電穿孔技術將pMV261A985BTRAIL導入BCG構建rBCGTRAIL，大量制各rBCGTRAIL，分別用PCR擴增和Westernblotting檢測rBCGTRAIL菌體和培養(yǎng)上清中TRAIL的DNA和蛋白表達，