2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:腺樣囊性癌,又稱圓柱瘤(cylindroma),由Billroth首次報道,多數(shù)人認(rèn)為腫瘤來自涎腺導(dǎo)管,也可能來自口腔粘膜的基底細(xì)胞。腺樣囊性癌占涎腺腫瘤的5﹪~10﹪,在涎腺惡性腫瘤中占24﹪,其中在頜下腺及舌下腺中是居首位的惡性腫瘤,最多見的年齡是40~60歲。其主要的病理學(xué)特點(diǎn)為嗜神經(jīng)侵犯及易于遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移,目前對腺樣囊性癌多主張采用手術(shù)聯(lián)合放化療的綜合治療為主,其五年生存率一般在60﹪左右,其10年、15年、20年生存率分別為

2、30~39﹪、24~26﹪、12.5~21﹪,其療效仍然不能令人滿意。因此,探討新的治療方法具有極其重要的意義。 近年來腫瘤的基因治療發(fā)展迅速,主要的方法有自殺基因、免疫基因、多藥耐藥基因以及抗血管生成基因等。其中自殺基因被認(rèn)為是最有前景的基因治療方法之一。自殺基因治療,又稱酶/藥物前體療法(EPT),是利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)將哺乳動物中所不含有的自殺基因轉(zhuǎn)入到哺乳動物腫瘤細(xì)胞中,該基因表達(dá)的產(chǎn)物可將無毒性的藥物前體轉(zhuǎn)化為毒性藥物,從而

3、選擇性的殺傷腫瘤細(xì)胞,常用的自殺基因有單純皰疹病毒胸腺嘧啶核苷激酶(HSV—TK)基因和大腸桿菌胞嘧啶脫氨酶(CD)基因,前者催化無毒性抗病毒核苷類似物如丙氧鳥苷(GCV)、無環(huán)鳥苷(ACV)等成為單磷酸核苷衍生物(dTMP),然后在內(nèi)源性細(xì)胞激酶作用下轉(zhuǎn)化為有明顯毒性的三磷酸核苷(dTTP),作為DNA合成鏈的終止劑,干擾細(xì)胞DNA的合成;后者編碼的胞嘧啶脫氨酶可催化5-氟胞嘧啶(5-FC)脫氨為5-氟尿嘧啶(5-FU),然后代謝為有

4、毒性的5-氟尿嘧啶-5'三磷酸(5-FUTP)和5-氟-2'脫氧尿嘧啶-5'三磷酸(5-FdUTP),5-FUTP通過與UTP競爭性結(jié)合而抑制mRNA和tRNA的合成,5-FdUTP則作用于胸苷合成酶 (TS),導(dǎo)致TMP的衰竭而阻止DNA的合成,最終誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的凋亡。在以往的研究中單純皰疹病毒胸腺嘧啶核苷激酶/無環(huán)鳥苷系統(tǒng)(HSV—tk/GCV)是一種很常見的自殺基因治療系統(tǒng),由于前藥GCV不容易通過血腦屏障而在CNS應(yīng)用受到一定的

5、限制。而CD基因是另外一種自殺基因,哺乳動物細(xì)胞不含該酶,細(xì)菌和真菌能產(chǎn)生該酶,可將5—FC脫氨為5—FU。臨床上5—FC和5—FU的藥代動力學(xué)非常清楚,與5-FU不同,5-FC治療劑量對人體毒副作用不大,口服容易通過血腦屏障,這是CD/5-FC系統(tǒng)在治療口腔頜面部腫瘤實(shí)驗(yàn)研究中,比HSV—tk/GCV系統(tǒng)應(yīng)用廣泛的原因。本實(shí)驗(yàn)正是基于此,旨在構(gòu)建真核表達(dá)質(zhì)粒pIRES-CD,并將其轉(zhuǎn)染ACC-2細(xì)胞后,應(yīng)用前體藥物5-FC治療,初步探

6、討CD/5-FC系統(tǒng)對ACC-2細(xì)胞的殺傷作用及旁觀者效應(yīng),以尋求有效的自殺基因治療方法。 方法:首先根據(jù)CD的DNA序列設(shè)計(jì)、合成引物,并將擴(kuò)增后產(chǎn)物插入克隆載體pMD18-T中,獲得重組質(zhì)粒pMD18-T-CD,進(jìn)行PCR篩選及重組質(zhì)粒的酶切分析,然后將重組質(zhì)粒pMD18-T-CD插入經(jīng)相應(yīng)酶切的真核表達(dá)載體pIRES,獲得重組表達(dá)質(zhì)粒pIRES-CD,進(jìn)行菌落PCR初步鑒定及重組質(zhì)粒的酶切分析。然后以電穿孔方法將重組表達(dá)質(zhì)

7、粒pIRES-CD轉(zhuǎn)染ACC-2細(xì)胞,新霉素(Gerleticin G418)篩選后獲得穩(wěn)定表達(dá)的ACC-2/CD細(xì)胞,并經(jīng)RT-PCR鑒定CD基因是否整合到ACC-2細(xì)胞DNA鏈中并轉(zhuǎn)錄表達(dá)。加入不向濃度的5-FC對ACC-2/CD細(xì)胞和ACC-2細(xì)胞進(jìn)行處理,并以未加藥組作對照,MTT法檢測藥物的殺傷效果及其對ACC-2細(xì)胞體外生長增殖的影響,計(jì)算細(xì)胞生長抑制率(GIR)及半數(shù)抑制濃度(IC<,50>);并觀察ACC-2/CD與AC

8、C-2細(xì)胞在不同混育比例下應(yīng)用不同濃度5-FC對腺樣囊性癌的殺傷作用及旁觀者效應(yīng)。 結(jié)論: 1.成功克隆了大腸桿菌CD基因,并構(gòu)建了克隆載體.pMD18-T-CD,且對CD基因進(jìn)行序列分析顯示,克隆的序列和文獻(xiàn)報道的基本一致。 2.在克隆載體DMD18-T-CD的基礎(chǔ)上成功構(gòu)建了重組真核表達(dá)載體pIRS-CD,并進(jìn)行了菌落分析和酶切鑒定。 3.應(yīng)用電穿孔的方法成功將pIRES-CD轉(zhuǎn)染ACC-2細(xì)胞,并進(jìn)

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