BDNF基因修飾骨髓間充質干細胞的表達及對豚鼠螺旋神經元保護作用.pdf

1、中南大學博士學位論文BDNF基因修飾骨髓間充質干細胞的表達及對豚鼠螺旋神經元保護作用姓名：陳觀貴申請學位級別：博士專業(yè)：耳鼻咽喉科學指導教師：謝鼎華20090401博士學位論文中文摘要第二章BDNF基因修飾骨髓間充質干細胞正常豚鼠內耳移植的實驗研究目的BDNF基因修飾MSCs(B科師MSCs)是治療神經退變性疾病包括感音神經性聾的潛在有效方法，但首先要明確以下三個問題：一是手術及細胞移植對耳蝸功能及結構是否造成不良影響；二是基因修飾的M

2、SCs在耳蝸內存活和分布情況如何；最后是移植細胞在耳蝸內是否能較長時間維持表達目的基因的能力。目前還沒有轉基因MSCs內耳移植的報道，在此部分我們將在正常豚鼠耳蝸中對這些問題進行初步的探討。方法正常豚鼠分3組，組I：為空白對照組，組II：經鼓階開窗注射MSCs，組III：經鼓階開窗注射BDNFMSCs。移植細胞均經DAPI熒光標記。3個組的動物均在術前1d、術后7d及術后28d分別行ABR檢測，比較各組術前、術后的ABR閾值變化；分別取

3、術后7d及28d各組動物的耳蝸石蠟切片HE染色觀察耳蝸結構；熒光顯微鏡觀察移植細胞存活及分布；免疫組化方法檢測BDNF在耳蝸內的表達情況。結果經鼓階開窗移植細胞導致術后7d時ABR閾值的暫時性提高，術后28d后恢復至正常水平。耳蝸石蠟切片HE染色顯示實驗動物耳蝸內結構無明顯異常改變。組II和組III術后7d耳蝸切片可見熒光信號多分布于耳蝸底周的外淋巴腔(鼓階和前庭階)，極少量細胞能遷移到中階及蝸軸，術后28d移植細胞存活數量有所下降，但

4、兩組動物的移植細胞存活時間均超過28d，并且BDNF基因修飾MSCs能提高移植細胞術后28d時的存活率。免疫組化顯示組III部分移植細胞表達BDNF，術后28d的陽性表達率比術后7d有顯著性下降，而其余兩組無陽性染色。結論經鼓階開窗移植MSCs對聽力的損害是輕微(10dBSPL)和暫時的(28d)。移植后光鏡下耳蝸形態(tài)結構沒有明顯變化。移植細胞能存活并分布于耳蝸內各周，主要在耳蝸底周的外淋巴腔，BDNF基因轉染MSCs后可以提高移植細胞