hIL-37基因修飾的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)哮喘治療作用的研究.pdf

1、背景：全球有幾億人正遭受著哮喘的折磨，就本質(zhì)而言哮喘是由多種炎癥因子參與的呼吸道炎癥。IL-37是IL-1家族的一員，在既往的研究中人們已經(jīng)證實(shí)IL-37是一種很強(qiáng)的抑炎因子。Chris用IL-37轉(zhuǎn)基因小鼠建立腸炎模型時(shí)發(fā)現(xiàn)IL-37轉(zhuǎn)基因小鼠腸道病情更輕，David用IL-37干預(yù)肝炎時(shí)也發(fā)現(xiàn)IL-37可以有效的緩解病情，他們的研究結(jié)果充分的證明了IL-37對(duì)炎癥性疾病有很好的治療效果。IL-37因子比較昂貴且半衰期短，這讓它很難直

2、接應(yīng)用于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究，在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究時(shí)必須找到一個(gè)理想的基因表達(dá)載體來(lái)分泌IL-37，MSC就是這樣一種理想的基因表達(dá)載體。MSC作為基因表達(dá)載體可以高效的表達(dá)目的基因且具有向炎癥部位定向歸巢的作用。我們是否可以用IL-37基因修飾的MSC用于哮喘的治療？這個(gè)科學(xué)問(wèn)題的提出和解決將為臨床上哮喘的治療提供一種新的方案。
　　目的：研究IL-37對(duì)哮喘氣道炎癥的抑制作用，并探索其相關(guān)的機(jī)制。
　　方法：體外分離培養(yǎng)與提純小鼠MS

3、C。Ad-IL-37轉(zhuǎn)染MSC后用ELISA和Western檢測(cè)轉(zhuǎn)染Ad-IL-37后的MSC分泌IL-37的情況。建立小鼠哮喘治療模型，通過(guò)檢測(cè)血中的lgE lgG1濃度，肺泡灌洗液中IL-4 IL-5 IL-13濃度及細(xì)胞總數(shù)評(píng)價(jià)小鼠氣道炎癥程度。體外驗(yàn)證IL-37對(duì)DC的影響：實(shí)驗(yàn)組用LPS+IL-37處理DC24小時(shí)候，對(duì)照組用LPS處理DC24小時(shí)，24小時(shí)后用ELISA檢測(cè)DC分泌細(xì)胞因子的情況。體外驗(yàn)證IL-37對(duì)OT1

4、OT2 T細(xì)胞增殖的影響，磁珠分選DC然后用相應(yīng)的肽段OVA處理2小時(shí)，時(shí)間到后加入CFSE標(biāo)記的OT1或OT2 T細(xì)胞，實(shí)驗(yàn)組加入IL-37三天后收集細(xì)胞進(jìn)行流式分析。體外驗(yàn)證IL-37對(duì)惰性T細(xì)胞分化成Treg的影響，用Anti-CD3抗體刺激惰性T細(xì)胞，實(shí)驗(yàn)組加入IL-37+IL-2+TGF-beta對(duì)照組加入IL-2+TGF-beta五天后用流式分析結(jié)果。體外驗(yàn)證IL-37對(duì)Treg增殖的影響，分選出Treg染上CFSE加入一定

5、數(shù)量的DC，實(shí)驗(yàn)組加入IL-37+IL-2，對(duì)照組加入IL-2，五天后流式分析。
　　結(jié)果：通過(guò)CD45、CD11b雙陰選得到純度為90％ MSC符合后續(xù)實(shí)驗(yàn)的要求。Ad-IL-37腺病毒成功轉(zhuǎn)染MSC。ELISA及Western結(jié)果顯示Ad-IL37轉(zhuǎn)染后的MSC可以高效的表達(dá)IL-37。IL-37小鼠哮喘治療模型中ELISA結(jié)果顯示IL-37治療組小鼠肺泡灌洗液中IL-4、IL-5、IL-13促炎因子濃度下降，血清中OVA-l