二氧化鈦光動力聯(lián)合蟾毒靈對人黑色素瘤細(xì)胞A375的抗腫瘤作用及機(jī)制研究.pdf

1、一、研究目的
　　 使用具有高光反應(yīng)活性的二氧化鈦(Titanium dioxide，TiO2)，建立光動力平臺，并在此基礎(chǔ)上，聯(lián)合中藥單體蟾毒靈(Bufalin，Bu)，以人黑色素瘤A375細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)對象，探索二氧化鈦光動力聯(lián)合蟾毒靈對A375細(xì)胞的抗腫瘤作用及機(jī)制研究，希望能為臨床治療黑色素提供一種新的治療方法。
　　 二、研究方法
　　 (一)二氧化鈦光動力聯(lián)合蟾毒靈對A375細(xì)胞的抗腫瘤作用效應(yīng)觀察

2、>　　 采用二氧化鈦(TiO212.5μg/mL、25μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL)、紫外光(UVA800μW/cm2，75min)、二氧化鈦光動力(TiO212.5μg/mL、25μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL，UVA，800μW/cm2，75min)、蟾毒靈(Bu5nM、10nM、20nM、40nM、80nM)，作用于A375細(xì)胞，培養(yǎng)12h、24h、48h及72h

3、后，采用MTT方法，計(jì)算細(xì)胞增殖抑制率，探究二氧化鈦光動力、蟾毒靈對A375細(xì)胞增殖的影響。
　　 采用二氧化鈦光動力(TiO225μg/mL，UVA800μW/cm2，75min)、蟾毒靈(Bu10nM)、二氧化鈦光動力聯(lián)合蟾毒靈(TiO225μg/mL，UVA800μW/cm2，75min，Bu10nM)作用于A375細(xì)胞，培養(yǎng)12h、24h、48h及72h后，采用MTT方法，計(jì)算細(xì)胞增殖抑制率。同時(shí)使用光學(xué)顯微鏡，觀察細(xì)胞

4、形態(tài)變化。
　　 (二)二氧化鈦光動力聯(lián)合蟾毒靈對A375細(xì)胞的抗腫瘤作用機(jī)制研究
　　 采用二氧化鈦光動力聯(lián)合蟾毒靈(TiO225μg/mL，UVA800μW/cm2，75min)、二氧化鈦光動力(TiO225μg/mL，UVA800μW/cm2，75min)、蟾毒靈(Bu10nM)作用于A375細(xì)胞，借助于流式細(xì)胞儀，采用PI染色、AnnexinV-FITC/PI雙染、DCFH-DA染色等方法探究細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡及

5、細(xì)胞內(nèi)活性氧含量的變化情況，并采用WesternBlot探究二氧化鈦光動力聯(lián)合蟾毒靈對A375細(xì)胞中Bax、Bcl-2蛋白表達(dá)的影響。
　　 三、研究結(jié)果
　　 (一)二氧化鈦光動力聯(lián)合蟾毒靈對A375細(xì)胞抗腫瘤作用效應(yīng)觀察
　　 單用二氧化鈦光動力和蟾毒靈均能抑制A375細(xì)胞增殖，但當(dāng)二者聯(lián)合后，其對A375細(xì)胞的增殖抑制作用更強(qiáng)，明顯優(yōu)于單用二氧化鈦光動力、蟾毒靈，二者之間存在明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)

6、。當(dāng)二氧化鈦光動力聯(lián)合蟾毒靈作用于A375細(xì)胞后，A375細(xì)胞數(shù)量減少，且細(xì)胞皺縮、變圓、變小。
　　 (二)二氧化鈦光動力聯(lián)合蟾毒靈對A375細(xì)胞抗腫瘤作用的機(jī)制研究
　　 二氧化鈦光動力、蟾毒靈均可明顯增加A375細(xì)胞內(nèi)活性氧含量(P<0.05)，增強(qiáng)細(xì)胞內(nèi)Bax/Bcl-2蛋白的比例，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡或阻滯細(xì)胞周期，從而發(fā)揮對A375細(xì)胞的抗腫瘤作用。但二者的不同之處在于：二氧化鈦光動力可明顯誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，而蟾毒靈則主

7、要將細(xì)胞阻滯于S期。
　　 當(dāng)二氧化鈦光動力聯(lián)合蟾毒靈作用于A375細(xì)胞后，細(xì)胞內(nèi)的活性氧含量明顯增加，明顯高于單用二氧化鈦光動力或蟾毒靈的細(xì)胞(P<0.05)；且二氧化鈦光動力聯(lián)合蟾毒靈可通過誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，阻滯細(xì)胞周期發(fā)揮抗腫瘤作用。
　　 四、研究結(jié)論
　　 二氧化鈦光動力聯(lián)合蟾毒靈對A375細(xì)胞的抗腫瘤效果明顯優(yōu)于單用二氧化鈦光動力或蟾毒靈。二氧化鈦光動力聯(lián)合蟾毒靈可增加細(xì)胞內(nèi)活性氧含量，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，改變