溶組織內(nèi)阿米巴凝集素中間亞單位片段的表達(dá)及應(yīng)用研究.pdf

1、目的：重組表達(dá)溶組織內(nèi)阿米巴Gal/GalNAe可抑制性凝集素中間亞單位及其片段，并探討其血清學(xué)診斷價(jià)值和疫苗應(yīng)用價(jià)值。 方法與結(jié)果：用RT-PCR．的方法從溶組織內(nèi)阿米巴HM-1：IMSS株滋養(yǎng)體總RNA中擴(kuò)增除信號(hào)區(qū)的全長(zhǎng)Gal/GalNAe可抑制性凝集素中間亞單位(aa14到1088)、N-末端(aa14到382)、M段(aa294到753)和C-末端(aa603到1088)編碼基因，分別插入原核表達(dá)載體pET-19b，以

2、大腸桿菌BL21(DE3)pLysS進(jìn)行表達(dá)。 所獲得的重組蛋白，用ELISA法檢測(cè)它們與阿米巴病患者血清的反應(yīng)性。其中有癥狀阿米巴肝膿腫或阿米巴結(jié)腸炎患者50名、無(wú)癥狀包囊攜帶者9名、其他原蟲(chóng)病患者38名、健康人20名。重組全長(zhǎng)Igl的敏感性為98％，特異性為98％。N-末端、M段、C-末端的敏感性分別為40％、93％、98％；特異性均為98％。將敏感性與特異性均高的C-末端重組蛋白及溶組織內(nèi)阿米巴粗抗原作為抗原，用ELISA

3、檢測(cè)上海、安徽、河南三地215名HIV感染者中溶組織內(nèi)阿米巴血清陽(yáng)性率為12.09％，191名未感染HIV的胃腸疾病患者的陽(yáng)性率為3.14％，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.001)，三地HIV感染者抗溶組織內(nèi)阿米巴抗體陽(yáng)性率高于未感染人群。 另外用所得全長(zhǎng)Igl重組蛋白免疫中華倉(cāng)鼠，末次免疫7天后在倉(cāng)鼠肝內(nèi)注入溶組織內(nèi)阿米巴SAW755CR株滋養(yǎng)體，肝內(nèi)注射7天后，觀察免疫效果。Igl免疫的倉(cāng)鼠中有93％沒(méi)有出現(xiàn)肝膿腫，對(duì)照組有17

4、％的倉(cāng)鼠沒(méi)有出現(xiàn)肝膿腫。Igl免疫組倉(cāng)鼠產(chǎn)生的肝膿腫明顯小于對(duì)照組(P<0.001)，重組Igl能抑制倉(cāng)鼠肝膿腫的生長(zhǎng)。用N-末端、M段、C-末端免疫倉(cāng)鼠，N-末端和M段重組蛋白免疫的倉(cāng)鼠都出現(xiàn)肝膿腫，而C-末端免疫的倉(cāng)鼠沒(méi)有肝膿腫產(chǎn)生。為了進(jìn)一步確定保護(hù)性表位的位置，又克隆了表達(dá)第603到第873個(gè)氨基酸蛋白片段的質(zhì)粒，并表達(dá)其重組蛋白C-01，免疫倉(cāng)鼠后結(jié)果顯示免疫組有33％倉(cāng)鼠沒(méi)有產(chǎn)生膿腫，免疫組產(chǎn)生的膿腫明顯小于對(duì)照組，C-01

5、能夠抑制倉(cāng)鼠肝膿腫的生長(zhǎng)。 結(jié)論：溶組織內(nèi)阿米巴Gal/GalNAc可抑制性凝集素中間亞單位能被有癥狀阿米巴病患者血清識(shí)別，也能被無(wú)癥狀包囊攜帶者血清識(shí)別，其中C-末端重組蛋白在血清學(xué)診斷中有高特異性與高敏感性，可作為阿米巴病血清學(xué)診斷的抗原；我國(guó)某些地區(qū)艾滋病感染者中抗溶組織內(nèi)阿米巴抗體陽(yáng)性率高于HIV人群；重組Igl對(duì)倉(cāng)鼠肝膿腫的形成有抑制性作用，能夠作為預(yù)防阿米巴病的候選疫苗分子，其保護(hù)性表位可能位于第603到873個(gè)氨基