肝細(xì)胞核因子1β與肝癌術(shù)后復(fù)發(fā)和病理類型相關(guān)性的研究.pdf

1、背景及目的:肝細(xì)胞癌(Hepatocellular carcinoma，HCC)是世界范圍內(nèi)第六大常見(jiàn)惡性腫瘤，占腫瘤相關(guān)死亡的第三位，我國(guó)更是肝癌高發(fā)國(guó)家，每年新增患者占全球新發(fā)病例的一半以上。目前，盡管肝癌的治療方法呈多樣化發(fā)展，但其治療效果仍無(wú)顯著提高，高復(fù)發(fā)率和高轉(zhuǎn)移率對(duì)患者的生存有顯著影響。肝癌表現(xiàn)出顯著的腫瘤異質(zhì)性，臨床上表現(xiàn)為病情和診斷相似的患者，在接受相同的治療后，卻顯示不可預(yù)知的截然不同的預(yù)后。
　　近年來(lái)，隨著

2、對(duì)腫瘤干細(xì)胞(cancer stem cells，CSCs)研究的不斷深入，越來(lái)越多的證據(jù)表明腫痛的異質(zhì)性與CSCs的分化密切相關(guān)。CSCs是腫瘤中少數(shù)的可以啟動(dòng)和維持腫瘤生長(zhǎng)、保持自我更新能力的細(xì)胞。關(guān)于CSCs的起源，大多數(shù)觀點(diǎn)認(rèn)為其來(lái)源于正常干細(xì)胞。目前普遍認(rèn)為肝前體細(xì)胞(hepatic progenitor cells，HPCs)的激活與肝癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，HPCs被認(rèn)為是癌變的靶點(diǎn)之一。HPCs是一類肝臟特異的成體干細(xì)胞

3、，當(dāng)成熟肝細(xì)胞或膽管細(xì)胞受到損傷時(shí)，HPCs被激活。HPCs可以雙向分化為肝細(xì)胞和膽管細(xì)胞，也可在其分化過(guò)程中停滯、阻滯，細(xì)胞失去正常調(diào)控而停止在分化過(guò)程中的某個(gè)階段無(wú)限增殖，從而形成不同惡性程度、不同干性特征的肝細(xì)胞癌，使肝癌具有高度的異質(zhì)性。前體細(xì)胞向不同方向分化決定了肝癌的不同病理類型。
　　世界衛(wèi)生組織（World Health Organization，WHO）將原發(fā)性肝癌分為肝細(xì)胞癌(HCC)，肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌(ICC)

4、，以及同時(shí)具備前兩者組織學(xué)特征的混合型肝細(xì)胞-膽管細(xì)胞癌(CHC)三類。HCC的預(yù)后好于ICC和CHC，提示不同病理類型腫瘤異質(zhì)性影響患者的預(yù)后。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，肝細(xì)胞癌中存在一類具有干/祖細(xì)胞表型的HCC，其高表達(dá)膽管細(xì)胞標(biāo)志物/祖細(xì)胞標(biāo)志物K19，具有更高的侵襲性和更差的預(yù)后。這些研究為肝癌的分子分型和相應(yīng)治療策略提供了依據(jù)。目前，越來(lái)越多的越來(lái)越多的研究根據(jù)HCC不同的分子特征對(duì)其進(jìn)行分型。
　　肝細(xì)胞核因子-1beta（H

5、epatocyte nuclear factor-1 beta，HNF1β）屬于組織特異性的包含同源結(jié)構(gòu)域的轉(zhuǎn)錄因子，和HNF1α同屬HNF1家族，是一種核蛋白。HNF1β高表達(dá)于成年動(dòng)物的膽管上皮細(xì)胞。在肝臟發(fā)育過(guò)程中，肝細(xì)胞核因子調(diào)節(jié)肝祖細(xì)胞特異基因表達(dá)，其中HNF1β在肝祖細(xì)胞向膽管上皮細(xì)胞的分化過(guò)程中具有重要作用。近年來(lái)，研究報(bào)道HNF1β的表達(dá)與多種癌癥風(fēng)險(xiǎn)有關(guān)，然而關(guān)于HNF1β與肝癌的研究報(bào)道較少。HNF1β作為一個(gè)膽管細(xì)

6、胞的特異性標(biāo)志物，在成人肝臟中只表達(dá)于膽管上皮細(xì)胞，而不表達(dá)于成熟肝細(xì)胞。我們推測(cè)，HNF1β的表達(dá)可能與肝癌的病理類型和預(yù)后相關(guān)。
　　因此，我們使用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)了HCC和ICC組織中HNF1β的表達(dá)，比較HNF1β在不同病理類型肝癌中的表達(dá)差異，并在HCC中分析HNF1β的表達(dá)與患者術(shù)后復(fù)發(fā)、生存的關(guān)系，探討可能的機(jī)制。
　　方法:
　　1.收集臨床資料:回顧性地收集了183例原發(fā)為HCC，69例原發(fā)為IC

7、C的肝癌患者的臨床資料和蠟塊標(biāo)本，所有患者接受手術(shù)治療，術(shù)后隨訪患者的復(fù)發(fā)和生存情況。
　　2.免疫組織化學(xué)染色與評(píng)估:在癌組織中，用免疫組化技術(shù)檢測(cè)HNF1β和干系標(biāo)志物（K19，K7，EpCAM和OV6）的表達(dá)情況，免疫組化強(qiáng)度評(píng)估采用計(jì)算機(jī)輔助計(jì)算和主觀評(píng)價(jià)。用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法分析它們之間的相關(guān)性，以及對(duì)患者術(shù)后生存和復(fù)發(fā)的影響。在癌旁組織中，用免疫組化方法檢測(cè)HNF1β表達(dá)情況，以及癌旁膽管反應(yīng)(ductular reactio

8、n，DR)狀況。癌旁膽管反應(yīng)主要檢測(cè)DR的增殖狀態(tài)(PCNA indexof ductular reaction，PIDR)。用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法分析癌旁HNF1β表達(dá)與PIDR的相關(guān)性，以及對(duì)術(shù)后復(fù)發(fā)的影響。
　　3.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:連續(xù)變量接受正態(tài)性檢驗(yàn)，均數(shù)比較用students t檢驗(yàn)或方差分析，分類變量采用卡方檢驗(yàn)或Fisher確切概率法分析，相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)性檢驗(yàn)，單因素生存分析采用Kaplan-Meier法，生

9、存率的比較采用Log-rank檢驗(yàn)，多因素生存分析采用Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型。P＜0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1、組織學(xué)和臨床數(shù)據(jù):183例原發(fā)為HCC的病例中，169例(92.3％)病人術(shù)后發(fā)生了復(fù)發(fā)，其中有15例復(fù)發(fā)時(shí)發(fā)生了病理類型改變，改變?yōu)镮CC。
　　2、HCC與ICC癌組織中HNF1β表達(dá)的比較:69例ICC癌組織中59例(85.5％)為陽(yáng)性表達(dá)，其中22例為3+，24例為2+，13例為1+。1

10、83例HCC癌組織中，82例(44.8％)為陽(yáng)性表達(dá)，其中35例為3+，14例為2+，33例為1+。ICC中HNF1β的表達(dá)顯著高于HCC。
　　3、病理類型改變組和病理類型未改變組HNF1β表達(dá)比較:復(fù)發(fā)病理類型改變組15例HCC均為陽(yáng)性染色，其中12例3+，1例2+，2例1+。復(fù)發(fā)病理類型未改變組154例中，64例(41.6％)為陽(yáng)性染色，其中22例3+，13例2+，29例1+。病理類型改變組HNF1β表達(dá)顯著高于病理類型未改

11、變組。
　　4、HCC癌組織中HNF1β的表達(dá)與臨床指標(biāo)的相關(guān)性分析:HCC癌組織中高表達(dá)HNF1β與更差的組織學(xué)分級(jí)和更高的TNM分期有顯著的相關(guān)性。
　　5、單因素與多因素生存分析:在HCC患者總體生存分析中，多因素分析發(fā)現(xiàn)，癌組織中HNF1β表達(dá)、癌組織中K7表達(dá)、腫瘤大小、腫瘤數(shù)目和MVI為總體生存的獨(dú)立預(yù)后因素。在無(wú)瘤生存分析中，腫瘤HNF1β表達(dá)、TNM分級(jí)和MVI為患者無(wú)瘤生存的獨(dú)立影響因素。
　　6、H

12、CC組織中HNF1β的表達(dá)與肝前體細(xì)胞標(biāo)志物的表達(dá)呈正相關(guān): K7(r=0.463，P＜0.001), K19(r=0.286, P＜0.001), EpCAM(r=0.210, P=0.004), OV6(r=0.279,P＜0.001)。
　　7、HCC癌旁組織中HNF1β的表達(dá)與PIDR呈正相關(guān)(r=0.312，P＜0.001)，并且與術(shù)后無(wú)瘤生存率呈負(fù)相關(guān)。
　　結(jié)論:
　　1.HNF1β在不同病理類型的原發(fā)性