ARF基因?qū)霟煵莸倪z傳轉(zhuǎn)化研究.pdf

1、中南林業(yè)科技大學(xué)碩士學(xué)位論文ARF基因?qū)霟煵莸倪z傳轉(zhuǎn)化研究姓名：陸艷申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：林木遺傳育種指導(dǎo)教師：徐剛標(biāo)20060601碩十論文 A R F 幕嘲導(dǎo)入煙草的遺傳轉(zhuǎn)化研究A B S T R A C TA u x i ne f f e c t sa “t h eg r o w t hd e v e l o p m e n tp e r i o d so fp l a n t s ．T h ep r o m o t e r

2、so fa u x i n e a r l yo r p r i m i t i v e r e a c t i o n g e n e g e n e r a l l yi n c l u d e t h em i n i m a la u x i nr e a c t i o ne l e m e n ts e q u e n c e ( T G T C T C ) ．A u x i n r e s p o n s i v ef a

3、 c t o r ( A R F )c o m b i n e sw i t ht h i sk i n do fa u x i nr e a c t i o ne l e m e n t su n i q u e l ya n d c o n t r o lt h ee x p r e s s i o n o f a u x i nr e a c t i o n g e n e ．I t h a sb e e n r e p o r

4、t e d t h a t A R Fg e n ee x p r e s s i o nw a gn o t e f f e c t e d b y a u x i n c o n c e n t r a t i o n ．W ee x p e c t t h a t t h et r a n s g e n i c t o b a c c op l a n tb e c o m eab i o r e a e t o ra n dd

5、 e v e l o pan e ww a y t op r o d u c e a u x i np r o t e i n ．I nt h i s p a p e r ，t o b a c c oa s e p t i cs e e d l i n gl e a fw e r eu s e da se x p l a n t s ，a n dt h eg e n e w a st r a n s f e r r e d i n t

6、o t o b a c c ob y A g r o b a c t e r i u mL B A 4 4 0 4 m e d i a t i o nw h i c hh a s b e e n i n s e r t e d w i t h t h e p l a n t e x p r e s s i o n v e c t o r p B i n 4 3 8 t h a tc o n t a i nA R F p r o m o

7、t e ra n dl a i d af o u n d a t i o nf o r s c a l ep r o d u c t i o no fA R Ff r o mt r a n s g e n i cp l a n t ，T h em a i n r e s u l t s a r ea sf o l l o w s ：1 ．R e g e n e r a t i o n s y s t e mo fp l a n t s

8、．T h er e g e n e r a t i o n s y s t e m o f t o b a c c o w a se s t a b l i s h e d ．T h e a d v e n t i t i o u ss h o o t s w e r e i n d u c e d f r o m l e a f e x p l a n t s o ft o b a c c o b a s e d o nM Sb a

9、s a lm e d i u ms u p p l e m e n t e d w i t hO ．8 m g ／L 6 - B Aa n dO ．0 5 m g ／L N A A ．T h e n t h er e g e n e r a t e dp l a n t s w e r e r o o t e d o n I ／2 M S m e d i u m c o n t a i n i n g0 ．0 2 m g ／LN A A

10、 a n dO ．0 2 m g ／LI B A ．A n d t h e f r e q u e n c yw a sa b o u t 9 6 ．9 ％。9 6 ．7 ％r e s p e c t i v e l y ．2 ．T r a n s f o r m a t i o n a n d s e l e c t i o no fp l a n t s ．L e a f e x p l a n t s h a d b e e n

11、p r e - c u l t u r e d f o r 2 d a y s ，t h e n i m m e r s e d i nA g r o b a c t e r i u m s u s p e n s i o n f o r 5 - 6 m i n u t e s ．T h e C O - c u l t i v a t i o n h a db e e nc a r r i e do u tf o r2 - 3 d a

12、y s ．A f t e rt h a t ，t h e t r a n s f o r m a n t sw e r e o b t a i n e d b yt r a n s f e r r i n g e x p l a n t s t o s e l e c t i o n m e d i u mc o n t a i n i n g 7 5 m g ／Lk a n a m y c i na n d r o o t i n g

13、 m e d i u mc o n t a i n i n g 7 5 m g ／L 、1 0 0 m g ／L k a n a m y e i n ．A n d i t sr o o t e df r e q u e n c yw a s 6 6 ．1 ％．I n c o m p a r i s o nw i t hC K ，o b v i o u sm o r p h o l o g i c a lv a r i a t i o n

14、 w a so b s e r v e di nt h e t r a n s g e n i ct o b a c c o s ．T h e i rl e a v e s b e c a m eg r e e n e r a n dt h i c k e r ，c h i e fv e i n st u r n e db o l d e ra n d t h i c k e r t h a nt h o s eo f C K ．3 ．