hTERT-659G＞A SNP位點的多態(tài)性分析及其與腫瘤易感性的相關性研究.pdf

1、研究表明端粒酶的激活可能是體細胞向腫瘤細胞轉變的關鍵步驟,是細胞癌變的早期事件。絕大多數(shù)腫瘤的發(fā)生是環(huán)境因素與腫瘤遺傳易感因素共同作用的結果。單核苷酸多態(tài)性是腫瘤遺傳易感性研究的熱點領域。對人端粒酶逆轉錄酶(Human Telomerase Reverse Transcriptase, hTERT)基因上的單核苷酸多態(tài)性位點與腫瘤易感性之間關系的研究目前國外有少量文獻報道,國內尚屬空白。本課題對hTERT基因上的rs2736098單核苷

2、酸多態(tài)位點與中國漢族人群腫瘤易感性的關系進行了研究。rs2736098 SNP位點為hTERT基因第2外顯子上的丙氨酸同義突變cSNP位點,為鳥嘌呤到腺嘌呤的堿基轉換突變。 采集健康查體者靜脈血樣100例、非腫瘤患者靜脈血樣65例、腫瘤患者靜脈血樣123例。其中在非腫瘤患者中男性33例,女性32例,腫瘤患者中男性72例,女性51例。應用兩對內側引物和一對外側引物進行PCR擴增,并設計了針對該單核苷酸多態(tài)位點的寡核苷酸探針,建立了

3、單堿基突變的點雜交檢測方法,并對上述所有樣本進行了基因型分析。應用PCR-SSCP結合DNA序列測定法對雜交結果進行驗證。 研究結果發(fā)現(xiàn)在全部檢測人群(288人)中,GG基因型244例,AG基因型35例,AA基因型9例,基因型頻率符合哈迪-溫伯格平衡。其中A等位基因頻率為0.090,G等位基因頻率為0.910,比較發(fā)現(xiàn)本研究人群的SNP位點等位基因頻率與NCBI數(shù)據(jù)庫上收錄的該SNP位點中國漢族人群中的等位基因頻率有較大差異,與

4、非洲人群中的分布頻率近似。 在對該SNP位點與腫瘤易感性的分析中,發(fā)現(xiàn)腫瘤患者組中該SNP位點的A等位基因的頻率要高于非腫瘤組中的個體,統(tǒng)計學差異極顯著(P<0.01)。發(fā)現(xiàn)腫瘤組的男性患者中該SNP位點的等位基因A的頻率要高于非腫瘤組的男性患者,統(tǒng)計學差異極顯著(P<0.01)。與腫瘤組女性相比,腫瘤組男性個體的腫瘤患病風險要高,OR值為2.07。提示該SNP位點的G→A的轉換可以增加攜帶者,特別是男性個體的腫瘤患病風險。

5、 在實驗過程中,還發(fā)現(xiàn)所有AA基因型樣本在常規(guī)條件下應用內側引物1均無PCR產(chǎn)物擴增,且不受模板濃度和rTaqDNA聚合酶的影響。在換用內側引物2和外側引物、或高保真DNA聚合酶、或引物配比、或100℃變性溫度下可擴增出相應的PCR產(chǎn)物。 本課題研究結果顯示：1)中國漢族人群中的rs2736098 SNP位點的等位基因頻率與非洲人群中的分布頻率近似。2)該SNP位點與腫瘤易感性之間存在一定的關系,可以增加攜帶者,特別是男性個