煙堿型乙酰膽堿受體α7亞型在大鼠實驗性牙周炎牙周組織表達(dá)的研究.pdf

1、大量的流行病學(xué)調(diào)查和研究表明，吸煙是牙周病尤其是重度牙周炎的高危因素。吸煙者較不吸煙者牙周炎的患病率高、病情重。吸煙與附著喪失、牙周袋形成、骨喪失等密切相關(guān)。然而，吸煙對牙周組織破壞作用的機制仍不明了。以往的研究認(rèn)為，乙酰膽堿受體主要存在于神經(jīng)或神經(jīng)相關(guān)組織中。然而，最近有研究發(fā)現(xiàn)在機體非神經(jīng)部位也存在乙酰膽堿受體，其中包括人的口腔上皮組織。但是，乙酰膽堿受體是否在牙周組織中有表達(dá)以及尼古丁對該受體表達(dá)的影響尚不清楚。因此，本研究采用動

2、物實驗、Micro-CT建模、免疫組化和原位雜交等方法觀察牙周組織是否存在煙堿型乙酰膽堿受體α7亞型（α7nicotineacetylcholinereceptor，α7nAChR）及尼古丁對該受體表達(dá)的影響，旨在探討α7nAChR在吸煙與牙周病發(fā)生發(fā)展過程中的可能作用和尼古丁對牙周炎發(fā)生發(fā)展的影響。
　　1、建立大鼠實驗性牙周炎動物模型
　　36只6周齡SD大鼠，經(jīng)戊巴比妥麻醉、固定，絲線結(jié)扎上頜右側(cè)第二磨牙頸部，左側(cè)不予

3、結(jié)扎作為自身對照。大鼠經(jīng)結(jié)扎后隨機分成對照組（A）及尼古丁注射低劑量（B）和高劑量（C）實驗組，分別給予生理鹽水和尼古丁0.83mg/kg/d、1.67mg/kg/d腹腔注射。于實驗第14天和28天分別處死大鼠，取雙側(cè)上頜磨牙區(qū)牙體牙周組織，Micro-CT掃描，常規(guī)制作石蠟切片。臨床檢查發(fā)現(xiàn)各組結(jié)扎側(cè)在第14天可觀察到結(jié)扎處牙齦組織不同程度的炎癥現(xiàn)象，28天時癥狀進(jìn)一步加重。而各組對照側(cè)均未觀察到明顯牙周炎癥表現(xiàn)。組織學(xué)和Micro-

4、CT方法證實牙頸部絲線結(jié)扎方法可成功的建立大鼠實驗性牙周炎模型，腹腔注射尼古丁可加重大鼠牙槽骨喪失，呈劑量依賴性。
　　2、建立牙周炎大鼠牙槽骨的Micro-CT三維模型，研究尼古丁對大鼠實驗性牙周炎牙槽骨的影響
　　Micro-CT掃描建立牙周炎大鼠的牙槽骨三維模型，進(jìn)行線性測量各組ABL值以評價牙槽嵴高度喪失，三維測量BMD、BVF、Tb.Th、Tb.N、Tb.Sp等指標(biāo)以評價牙槽骨骨量和骨小梁改變情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，A、B

5、、C三組結(jié)扎側(cè)與非結(jié)扎側(cè)比較，結(jié)扎側(cè)ABL值均顯著高于非結(jié)扎側(cè)，且隨著尼古丁劑量增加牙槽骨高度喪失進(jìn)一步加重，呈劑量依賴性。提示絲線結(jié)扎可造成大鼠牙槽骨高度降低，給予尼古丁可進(jìn)一步加重這種改變。配對t檢驗和相關(guān)性檢驗結(jié)果顯示，三組結(jié)扎側(cè)的BMD、BVF、TB.N、Tb.Th均顯著低于非結(jié)扎側(cè)，且隨著尼古丁給藥劑量增加，雙側(cè)BMD、BVF、Tb.Th均逐漸降低，呈劑量依賴性。而三組結(jié)扎側(cè)Tb.Sp均顯著高于非結(jié)扎側(cè)。方差分析結(jié)果顯示，雙側(cè)

6、BMD、BVF、Tb.Th、Tb.Sp組間比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義。表明絲線結(jié)扎可造成大鼠結(jié)扎側(cè)牙槽骨松質(zhì)骨骨密度、骨量、骨小梁厚度等指標(biāo)降低，骨小梁分離度增加，呈現(xiàn)骨質(zhì)疏松趨勢；給予尼古丁后，可加重這些改變，并呈劑量依賴性。
　　3、免疫組化和原位雜交方法檢測煙堿型乙酰膽堿受體α7亞型在大鼠正常及實驗性牙周炎牙周組織的表達(dá)
　　在實驗第14天和28天分別處死大鼠取材，常規(guī)制作石蠟切片，行免疫組化和原位雜交染色。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在正