重組乙酰膽堿受體_亞單位-BirA識別多肽序列基因的構(gòu)建與表達(dá).pdf

1、分類號密級UDC學(xué)號200602022延邊大學(xué)碩士學(xué)位論文重組乙酰膽堿受體重組乙酰膽堿受體?亞單位亞單位BirA識別多肽序列基因的構(gòu)建與表達(dá)別多肽序列基因的構(gòu)建與表達(dá)ConstructionExpressionofRecombinantAcetylcholineReceptαSubunitBirARecognitionPolypeptideSequenceGene研究生姓名陳秋艷培養(yǎng)單位基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院指導(dǎo)教師姓名、職稱孟繁平教授學(xué)科專業(yè)病原

2、生物學(xué)研究方向自身免疫性疾病論文提交日期2009年4月5日延邊大學(xué)病原生物學(xué)專業(yè)碩士學(xué)位論文中文摘要1重組乙酰膽堿受體重組乙酰膽堿受體?亞單位亞單位BirABirA識別多肽序識別多肽序列基因列基因的構(gòu)建與表達(dá)的構(gòu)建與表達(dá)摘要目的：目的：構(gòu)建重組乙酰膽堿受體?亞單位BirA識別多肽序列基因（pcDNA3.1AChRαBirA）并對其進(jìn)行真核基因表達(dá)。方法：方法：設(shè)計引物生物素蛋白連接酶（BirA）識別多肽序列基因。將載體pcDNA3.1A

3、ChRα經(jīng)限制性核酸內(nèi)切酶Ecⅴ單酶切后，用低熔點瓊脂糖凝膠電泳回收并純化，與BirA識別多肽序列基因連接。將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化至感受態(tài)細(xì)胞E.coliDH5α并擴(kuò)增，再用Ecⅴ單酶切檢查BirA識別多肽序列基因插入的正確性，并測序驗證，然后將構(gòu)建成功的載體在中國倉鼠卵巢細(xì)胞（CHO）表達(dá)。表達(dá)產(chǎn)物以綠色熒光標(biāo)記，經(jīng)激光掃描共聚焦顯微鏡驗證。結(jié)果：結(jié)果：電泳檢查發(fā)現(xiàn)了大小為63bp的條帶，并測序驗證了插入的基因序列為BirA識別多肽序列基因。