α7nAchR激動(dòng)劑對(duì)體外循環(huán)致腸屏障損傷的保護(hù)作用.pdf

1、目的:通過觀察α7nAchR激動(dòng)劑(PHA568487)在膽堿能抗炎通路(CholinergicAnti-inflammatory Pathway，CAP)中對(duì)體外循環(huán)(cardiopulmonary bypass，CPB)致大鼠腸屏障損傷的影響，旨在探討其腸屏障的保護(hù)作用及可能機(jī)制。
　　方法:由沈陽(yáng)軍區(qū)總醫(yī)院動(dòng)物科研中心提供的成年雄性SD大鼠96只(重量450±50g)，隨機(jī)(數(shù)字表法)分為4組，即假手術(shù)組(S組)、體外循環(huán)組

2、(C組)、α7nAChR激動(dòng)劑(PHA568487)+CPB組(CP組)、α7nAChR激動(dòng)劑(PHA568487)+α7nAhR阻斷劑(Methyllycaconitine，MLA)+CPB組(CPM組)。每組按4個(gè)采血時(shí)間再隨機(jī)分成4個(gè)亞組，分別為CPB開始前(T0)，停CPB即刻(T1)，CPB后2h(T2)，CPB后6h(T3)，每個(gè)亞組再隨機(jī)分配6只實(shí)驗(yàn)鼠。對(duì)禁食(6h)的大鼠腹腔內(nèi)注射10％水合氯醛300mg/kg實(shí)施麻醉。

3、建立大鼠CPB模型，S組只置管不轉(zhuǎn)流，C組置管后進(jìn)行體外循環(huán)，CP組在轉(zhuǎn)流前30min給予PHA568487(0.8mg/kg)進(jìn)行腹腔注射，CPM組給予PHA568487(0.8mg/kg)進(jìn)行腹腔注射，于30min后給予MLA(6mg/kg)進(jìn)行腹腔注射。分別于T0、T1、T2、T3各時(shí)點(diǎn)取處死大鼠的腔靜脈血，經(jīng)ELISA法測(cè)定血清腸脂肪酸結(jié)合蛋白(I-FABP)、二胺氧化酶(DAO)、D-乳酸、白介素6(IL-6)、腫瘤壞死因子(

4、TNF-α)含量的變化;同時(shí)采用Western-blot法檢測(cè)腸上皮閉鎖蛋白(Occludin)和斑塊蛋白(ZO-1)的表達(dá);制作腸組織石蠟切片，并于光鏡下觀察其形態(tài)病理學(xué)變化;取器官(MLN、肝、腎、肺)組織勻漿以及腔靜脈血進(jìn)行細(xì)菌培植，并計(jì)算腸道細(xì)菌移位率。應(yīng)用SPSS19.0數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析，所有計(jì)量資料按均值±標(biāo)準(zhǔn)差(-x±SD)表示，組內(nèi)比較采用重復(fù)測(cè)量方差分析，組間比較采用單因素方差分析，計(jì)數(shù)資料比較應(yīng)用x2檢

5、驗(yàn)， p＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:1、光鏡結(jié)果顯示，S組腸黏膜排列整齊，變化不明顯;C和CPM組腸道黏膜損傷嚴(yán)重，可見其變薄，絨毛萎縮、變性、脫落以及壞死，嚴(yán)重部分可見水腫甚至出血;CP組腸道黏膜損傷明顯減輕，僅見黏膜下層毛細(xì)血管輕度充血，黏膜上皮輕度脫落以及腺體輕度擴(kuò)張。
　　2、血清IL-6和TNF-a水平的變化:與S組相比，C組、CP組和CPM組在T1～T3三個(gè)時(shí)點(diǎn)的IL-6和TNF-a水平水平均明顯升

6、高，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。與C組相比， CP組與CPM組在T1～T3三個(gè)時(shí)點(diǎn)的IL-6和TNF-a水平均明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。CPM組在T1～T3三個(gè)時(shí)點(diǎn)和CP組相比其水平有升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。
　　3、血清D-乳酸、DAO和I-FABP水平的變化:與S組相比，C組、CP組和CPM組在T1～T3三個(gè)時(shí)點(diǎn)的血清D-乳酸、DAO和I-FABP水平均顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜

7、0.05)。與C組相比，CP組、CPM組在T1～T3三個(gè)時(shí)點(diǎn)的三種指標(biāo)水平均明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。CPM組在T1～T3三個(gè)時(shí)點(diǎn)與CP組相比較，三種指標(biāo)水平均有升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。
　　4、腸上皮Occludin蛋白和ZO-1蛋白表達(dá)的變化:與S組相比，CP組、C組、CPM組在T1～T3三個(gè)時(shí)點(diǎn)的兩蛋白表達(dá)均降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。與C組相比，CP組和CPM組在T1～T3三個(gè)

8、時(shí)點(diǎn)的兩蛋白表達(dá)均有所增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。CPM組在T1～T3三個(gè)時(shí)點(diǎn)與CP組相比較，兩種蛋白表達(dá)均有降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。
　　5、遠(yuǎn)隔臟器細(xì)菌移位率:與S組相比，C組、CP組及CPM組T2時(shí)的細(xì)菌移位率均明顯增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。與C組相比，CPM組與CP組細(xì)菌移位率均有降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。而CPM組的細(xì)菌移位率又明顯高于CP組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜