GPS2對AIB1轉(zhuǎn)錄活性的影響.pdf

1、乳腺癌擴(kuò)增基因1(Amplifiedinbreastcancer1，AIB1)是一種類固醇受體輔激活因子，能通過招募p300等輔激活因子，增強(qiáng)核受體的轉(zhuǎn)錄活性，在動物的生長發(fā)育中起重要作用，并參與多種癌癥的發(fā)生、發(fā)展。G蛋白途徑抑制因子2(G-proteinpathwaysuppressor，GPS2)是一種轉(zhuǎn)錄輔調(diào)節(jié)因子，在不同的生理過程中，通過與其它輔抑制或輔激活因子形成轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物，抑制或激活下游靶基因轉(zhuǎn)錄，在細(xì)胞周期調(diào)控、DN

2、A修復(fù)和脂質(zhì)代謝等過程中發(fā)揮重要作用。
　　有研究表明GPS2能夠與p300相互作用，并增強(qiáng)乳頭瘤病毒蛋白E2的轉(zhuǎn)錄活性。以此為依據(jù)，本課題旨在研究GPS2與AIB1之間的相互作用，鑒定二者相互作用的區(qū)域，并探索GPS2與AIB1結(jié)合后增強(qiáng)AIB1轉(zhuǎn)錄活性，進(jìn)而促進(jìn)癌癥發(fā)生發(fā)展。本研究為相關(guān)腫瘤的治療提供新的途徑。
　　首先，分別構(gòu)建pBIND-GPS2和pACT-AIB1全長及缺失體的哺乳動物雙雜交質(zhì)粒，及Flag標(biāo)記的G

3、PS2與AIB1缺失體表達(dá)質(zhì)粒，為后續(xù)實驗做準(zhǔn)備:其次，使用哺乳動物雙雜交和免疫共沉淀實驗證明GPS2與AIB1存在相互作用，并通過免疫熒光實驗確定二者在細(xì)胞內(nèi)存在共定位，說明二者的相互作用在生理上存在相關(guān)性;另外，進(jìn)一步的研究表明GPS2通過其110-234氨基酸區(qū)域與AIB1的612-1004氨基酸區(qū)域（該區(qū)域主要功能域為核受體相互作用區(qū)域NRID）結(jié)合;最后，使用熒光素酶報告基因?qū)嶒灠l(fā)現(xiàn)GPS2通過劑量依賴的方式增強(qiáng)AIB1的轉(zhuǎn)錄