麥胚無細胞蛋白合成系統(tǒng)表達惡性瘧原蟲環(huán)子孢子蛋白的研究.pdf

1、瘧原蟲環(huán)子孢子蛋白(CSP)蛋白是平均分布在瘧原蟲子孢子上的一層表被蛋白，是惡性瘧原蟲子孢子時期的重要保護性抗原，也是瘧疾疫苗研究中的重要候選抗原之一。然而因該蛋白結構復雜，至今尚無合適的蛋白合成系統(tǒng)表達和制備出理想的重組CSP 作為瘧疾疫苗應用。麥胚無細胞蛋白合成系統(tǒng)屬于無細胞合成系統(tǒng)中的真核蛋白合成系統(tǒng)，是不同于基于細胞的蛋白合成系統(tǒng)的一種新的蛋白合成體系，可克服迄今其他各種基因工程蛋白合成技術所存在的缺點，國外已有學者在進行使用麥

2、胚無細胞蛋白合成系統(tǒng)表達瘧原蟲蛋白的研究，已有文獻支持該系統(tǒng)在瘧原蟲蛋白的表達上具有獨有的優(yōu)越性，所以本課題運用該系統(tǒng)合成惡性瘧原蟲CSP，以探討其作為瘧疾疫苗的可行性和為新型瘧疾疫苗研究建立基礎。
　　 目的：應用麥胚無細胞蛋白合成系統(tǒng)表達出具有生物活性的惡性瘧原蟲CS 蛋白。
　　 方法：依據(jù)PlasmoDB 上查得的惡性虐原蟲Pf3D7 株CSP基因序列，設計一對引物，經(jīng)PCR擴增出CSP基因全序列。用NcoI與S

3、maI DNA內(nèi)切酶雙酶切PCR產(chǎn)物后，與同樣雙酶切的pIVEX 1.3WG 載體連接，轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5а株，獲得pIVEXWG 1.3-CSP表達質(zhì)粒。常規(guī)方法對質(zhì)粒進行鑒定和DNA測序分析。將pIVEX WG1.3-CSP 質(zhì)粒加入到麥胚無細胞蛋白合成系統(tǒng)進行表達，優(yōu)化不同表達條件，對表達產(chǎn)物進行原蟲蛋白部分性狀鑒定與分析。
　　 結果：PCR成功擴增出CSP基因序列；成功構建了用于麥胚無細胞系統(tǒng)的pIVEX WG 1.3