轉(zhuǎn)分化和未轉(zhuǎn)分化人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞在腦損傷修復(fù)中的比較研究.pdf

1、創(chuàng)傷性腦損傷(traumaticbraininjury，TBI)是一種嚴(yán)重影響人們生活質(zhì)量的中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷。大多數(shù)TBI病人長(zhǎng)期遭受認(rèn)知、運(yùn)動(dòng)和感覺(jué)等功能缺陷后遺癥困擾，給患者、患者家庭和社會(huì)帶來(lái)了沉重的負(fù)擔(dān)。盡管科研工作者在如何治療TBI后遺癥方面進(jìn)行了長(zhǎng)期不懈地努力，然而截止目前仍然沒(méi)有找到有效的治療方法，特別是認(rèn)知功能缺陷(cognitivedeficits)仍然是困擾醫(yī)療界的一個(gè)難題。
　　 為了攻克TBI后遺癥，科學(xué)

2、家們嘗試了各種各樣的方法，越來(lái)越多的證據(jù)表明細(xì)胞移植是其中最有應(yīng)用前景的治療手段之一。目前有多種細(xì)胞被用于臨床和實(shí)驗(yàn)研究。理論上來(lái)說(shuō)，胚胎干細(xì)胞(embryonicstemcells，ESCs)是細(xì)胞移植的最佳種子細(xì)胞，但是由于受倫理道德和胚胎組織來(lái)源不足等因素的的限制，ESCs很難在實(shí)驗(yàn)研究和臨床上應(yīng)用推廣。目前在實(shí)驗(yàn)研究和臨床上使用得最為廣泛的種子細(xì)胞是骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bonemarrowstromalcells，BMSCs)，然

3、而B(niǎo)MSCs的增殖和分化能力會(huì)隨著供者年齡的增長(zhǎng)而顯著下降，而且BMSCs的獲取過(guò)程是一個(gè)疼痛的有創(chuàng)操作過(guò)程。所以尋找新的干細(xì)胞替代來(lái)源仍然是十分必要的。近年來(lái)一種新的細(xì)胞引起了科研工作者的廣泛關(guān)注，這種細(xì)胞叫人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞（humanumbilicalmesenchymalstemcells，HUMSCs）。HUMSCs不是來(lái)源于臍帶血而是來(lái)源于臍帶間充質(zhì)的干細(xì)胞，相對(duì)于ESCs或BMSCs，HUMSCs具有以下優(yōu)點(diǎn):(1)無(wú)倫理

4、道德?tīng)?zhēng)議;(2)來(lái)源豐富，體外增殖能力強(qiáng);(3)獲取方便，無(wú)痛無(wú)創(chuàng)。HUMSCs的以上優(yōu)點(diǎn)引起了細(xì)胞移植方面科研工作者的極大興趣。
　　 近來(lái)，有些團(tuán)隊(duì)報(bào)道HUMSCs可分泌神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(neurotrophins)，并且對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病表現(xiàn)出治療作用。另一方面，有些實(shí)驗(yàn)室報(bào)道HUMSCs在體外可分化為神經(jīng)樣細(xì)胞，但是受到另外一些團(tuán)體的質(zhì)疑。前不久，我們用Hermann等的方法在體外成功地將HUMSCs轉(zhuǎn)分化為具有神經(jīng)干細(xì)胞(

5、neuralstemcells)特點(diǎn)的臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞源神經(jīng)球(humanumbilicalmesenchymalstemcells-derivedneurospheres，HUMSC-NSs)，我們接著將這些HUMSC-NSs移植到脊髓全橫斷大鼠模型中，10周后，一些HUMSC-NSs在體內(nèi)分化為神經(jīng)樣細(xì)胞并對(duì)運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù)表現(xiàn)出了促進(jìn)作用。那么，轉(zhuǎn)分化和未轉(zhuǎn)分化的臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞到底誰(shuí)的效果更好呢？據(jù)我們了解，目前還沒(méi)有在相同條件下的

6、比較研究報(bào)道。事實(shí)上，關(guān)于間充質(zhì)干細(xì)胞移植前是否需要轉(zhuǎn)分化一直存在爭(zhēng)議。所以，進(jìn)行間充質(zhì)干細(xì)胞轉(zhuǎn)分化前后的比較研究是迫切需要的。
　　 基于以上背景，本課題選用HUMSCs為本研究的種子細(xì)胞，首先建立HUMSCs的分離和培養(yǎng)方法，并研究臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的生物學(xué)特性，為臨床治療的種子細(xì)胞刷選提供理論依據(jù)。其次，用改良的兩步法對(duì)HUMSCs向神外胚層細(xì)胞方向進(jìn)行轉(zhuǎn)分化，檢測(cè)HUMSCs是否能跨胚層轉(zhuǎn)分化為神經(jīng)樣細(xì)胞。最后，將HUMS

7、Cs-NSs和HUMSCs移植到TBI大鼠模型上，對(duì)他們的治療效果進(jìn)行比較，以確認(rèn)移植前的轉(zhuǎn)分化是否有必要。同時(shí)探討細(xì)胞移植治療腦損傷的可能機(jī)制。考慮到將HUMSCs-NSs和HUMSCs移植到大鼠腦內(nèi)是異種移植，我們還對(duì)HUMSCs-NSs和HUMSCs進(jìn)行了免疫排斥檢測(cè)。本論文包括以下三個(gè)章節(jié):
　　 第一章:人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)和鑒定
　　 目的:建立分離、培養(yǎng)人臍帶基質(zhì)干細(xì)胞(HUMSCs)的方法，了解

8、其生物學(xué)特性。
　　 方法:采用膠原酶消化法從足月妊娠健康新生兒的臍帶，通過(guò)貼壁法獲得原代培養(yǎng)的HUMSCs，并進(jìn)行傳代擴(kuò)增，并對(duì)其一般形態(tài)和體外擴(kuò)增能力進(jìn)行觀察分析，同時(shí)通過(guò)流式細(xì)胞檢測(cè)對(duì)其免疫表型進(jìn)行鑒定。所有數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤((x)±SE)表示，并用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS13.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。用單因素ANOVA分析對(duì)P1至P25代HUMSCs的倍增時(shí)間進(jìn)行進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)意義。
　　 結(jié)果:用膠

9、原酶消化法從臍帶中成功地分離培養(yǎng)出了HUMSCs。光鏡觀察見(jiàn)HUMSCs具備典型的MSCs的形態(tài)學(xué)特征。流式檢測(cè)結(jié)果顯示:HUMSCs高表達(dá)間充質(zhì)標(biāo)記物CD73(99.18％)，CD90(97.90％)，CD105(96.05％)和粘附分子CD29(99.12％)，CD44(99.97％)，CD166(99.11％);低表達(dá)造血系細(xì)胞表面標(biāo)記物CD34(0.05％)，CD45(0.91％)，血管內(nèi)皮性抗原CD31(0.02％)，人類(lèi)白細(xì)

10、胞抗原HLA-DR(0.17％)和細(xì)胞表面標(biāo)記物CD19(0.10％)。傳代培養(yǎng)顯示HUMSCs具備較強(qiáng)的體外擴(kuò)增能力，第1-25代HUMSCs之間的倍增時(shí)間波動(dòng)于26.74～27.68小時(shí)之間，經(jīng)單因素ANOVA統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果顯示第1-25代HUMSCs倍增時(shí)間之間的差異無(wú)顯著性（F值=0.056，P值=0.785），說(shuō)明整體而言每代細(xì)胞倍增時(shí)間無(wú)顯著差異，細(xì)胞增殖能力不因傳代而下降。
　　 結(jié)論:本研究通過(guò)膠原酶消化法成功建

11、立了HUMSCs體外培養(yǎng)體系。HUMSCs具有較強(qiáng)的體外擴(kuò)增能力，多次傳代后增殖特性穩(wěn)定，細(xì)胞免疫表型與典型MSCs相似，符合國(guó)際細(xì)胞治療協(xié)會(huì)的間充質(zhì)干細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)，是一種理想的成體干細(xì)胞，有望成為細(xì)胞移植的理想種子細(xì)胞。
　　 第二章:人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)外胚層樣細(xì)胞的轉(zhuǎn)分化研究
　　 目的:建立HUMSCs——HUMSC-NSs——神經(jīng)樣細(xì)胞的兩步轉(zhuǎn)分化方法。通過(guò)以上兩步轉(zhuǎn)分化法，首先為體內(nèi)移植治療TBI的研究提供無(wú)

12、倫理道德?tīng)?zhēng)議神經(jīng)干細(xì)胞源，其次對(duì)HUMSCs在體外是否能轉(zhuǎn)分化為神經(jīng)樣細(xì)胞進(jìn)行驗(yàn)證。此外，在體外對(duì)轉(zhuǎn)分化的HUMSCs(即HUMSC-NSs)和未轉(zhuǎn)分化的HUMSCs的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子分泌能力進(jìn)行比較，為在體內(nèi)研究移植前的轉(zhuǎn)分化是否有必要提供一些實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法:首先用神經(jīng)培養(yǎng)基(neurobasalmedium)，表皮生長(zhǎng)因子(epidermalgrowthfactor,EGF)，堿性成纖維生長(zhǎng)因子（basicfibrobl

13、astgrowthfactor,bFGF），神經(jīng)培養(yǎng)添加劑B27在體外將HUMSCs誘導(dǎo)為HUMSC-NSs，并對(duì)HUMSC-NSs是否表達(dá)神經(jīng)干細(xì)胞標(biāo)記物nestin進(jìn)行免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。然后進(jìn)一步用neurobasalmedium，N2，胎牛血清，馬血清和全反式維甲酸對(duì)HUMSC-NSs進(jìn)行終末誘導(dǎo)分化，并用免疫細(xì)胞化學(xué)和Westernblot對(duì)終末誘導(dǎo)分化結(jié)果進(jìn)行檢驗(yàn)。最后采用Elisa對(duì)HUMSCs條件培養(yǎng)基和HUMSC-NSs

14、條件培養(yǎng)基中的BDNF和NT-3蛋白水平進(jìn)行檢測(cè)。所有數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤((x)±SE)表示，并用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS13.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。對(duì)HUMSCs條件培養(yǎng)基和HUMSC-NSs條件培養(yǎng)基中的BDNF和NT-3ELISA檢測(cè)結(jié)果，采用t檢驗(yàn)進(jìn)行比較分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)意義。
　　 結(jié)果:通過(guò)本實(shí)驗(yàn)方案在體外成功地將HUMSCs誘導(dǎo)為具有神經(jīng)干細(xì)胞特點(diǎn)的HUMSC-NSs，經(jīng)免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)HUMSC-NSs為ne

15、stin強(qiáng)陽(yáng)性，而且HUMSC-NSCs具有自我更新能力。HUMSC-NSs經(jīng)終末誘導(dǎo)分化14天后，表達(dá)β-tubulinⅢ、GalC、GFAP和MAP2ab神經(jīng)標(biāo)記物的細(xì)胞比例分別為:19.2±3.0％、27±2％、42.8±3.8％和4.4±1.8％。而作為對(duì)照的未轉(zhuǎn)分化的HUMSCs不表達(dá)以上神經(jīng)標(biāo)記物。Elisa檢測(cè)結(jié)果顯示:HUMSCs條件培養(yǎng)基中的BDNF蛋白水平(128.75±9.22pg/ml)顯著高于HUMSC-NSs

16、條件培養(yǎng)基中的BDNF蛋白水平(81.36±8.39pg/ml)(t=3.802，P=0.003)。而且HUMSCs條件培養(yǎng)基中的NT-3蛋白水平(97.79±8.18pg/rl)也顯著高于HUMSC-NSs條件培養(yǎng)基中的NT-3蛋白水平(67.53±8.45pg/ml)(t=2.574，P=0.028)。
　　 結(jié)論:通過(guò)本實(shí)驗(yàn)方案成功建立了HUMSCs向神經(jīng)外胚層樣細(xì)胞轉(zhuǎn)分化的兩步誘導(dǎo)方案。HUMSC-NSs具備大部分神經(jīng)系

17、統(tǒng)來(lái)源NSCs的典型特征，為NSCs的獲取提供了新的來(lái)源。HUMSCs在體外可最終分化為神經(jīng)樣細(xì)胞，說(shuō)明HUMSCs在體外可實(shí)現(xiàn)跨胚層轉(zhuǎn)化。轉(zhuǎn)分化在提高HUMSCs向神經(jīng)樣細(xì)胞分化能力的同時(shí)卻降低HUMSCs分泌神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的能力，所以HUMSCs和HUMSCs-NSs誰(shuí)的效果更好，還有待體內(nèi)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。
　　 第三章轉(zhuǎn)分化和未轉(zhuǎn)分化人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞在腦損傷后認(rèn)知功能修復(fù)中的比較研究
　　 目的:在TBI大鼠模型上，比較

18、HUMSCs和HUMSC-NSs治療效果，以確定間充質(zhì)干細(xì)胞移植前的轉(zhuǎn)分化是否有意義，同時(shí)探討細(xì)胞移植治療TBI的機(jī)制。
　　 方法:改良自由落體打擊裝置制作成年SD大鼠TBI模型。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為4組:HUMSCs組、HUMSC-NSs組、Matrigel組和假手術(shù)組。損傷7天后，將10μLDiI標(biāo)記的HUMSCs和HUMSC-NSsMatrigel細(xì)胞懸液（含1×105個(gè)細(xì)胞）用微量注射器分別移植到HUMSCs移植組和HUM

19、SC-NSs組受損海馬內(nèi)，損傷對(duì)照組注射10μLMatrigel，假手術(shù)組未接受任何移植，移植后不給動(dòng)物使用任何免疫抑制劑。細(xì)胞移植術(shù)后24至28天采用Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)每天對(duì)各組動(dòng)物進(jìn)行認(rèn)知功能評(píng)價(jià)。并從組織形態(tài)學(xué)修復(fù)（大體形態(tài)學(xué)觀察、H&E染色和空洞分析），免疫排斥反應(yīng)、細(xì)胞在體內(nèi)的分化情況以及各組動(dòng)物海馬組織提取液中的BDNF和NT-3蛋白水平這幾方面對(duì)HUMSCs和HUMSC-NSs進(jìn)行綜合比較。實(shí)驗(yàn)中的所有數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)

20、準(zhǔn)誤((x)±SE)表示，并用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS13.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。對(duì)各實(shí)驗(yàn)組間空間學(xué)習(xí)記憶能力的比較采用重復(fù)測(cè)量資料的方差分析方法;為分析每一個(gè)時(shí)間點(diǎn)各組動(dòng)物在的認(rèn)知功能是否有差別，我們采用方差分析(one-wayANOVA)進(jìn)行組間的多重比較，組間的多重比較采用LSD檢驗(yàn)，方差不齊采用Welch法校正F檢驗(yàn)及DunnettT3多重比較。各實(shí)驗(yàn)組腦組織空洞分析采用單因素方差分析（one-wayANOVA），組間的多重比較采用LSD檢驗(yàn)

21、，方差不齊采用Welch法校正F檢驗(yàn)及DunnettT3多重比較。對(duì)HUMSCs移植組和HUMSCs-NSs移植組兩組間每種神經(jīng)細(xì)胞標(biāo)記物的比較分析采用t檢驗(yàn)。體內(nèi)海馬提取液中的BDNF和NT-3蛋白水平的比較采用單因素方差分析（one-wayANOVA），組間的多重比較采用LSD檢驗(yàn)，方差不齊采用Welch法校正F檢驗(yàn)及DunnettT3多重比較。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)意義。
　　 結(jié)果:認(rèn)知功能恢復(fù)情況:重復(fù)測(cè)量方差分析

22、結(jié)果顯示各組老鼠整體上顯示出顯著的分組效應(yīng)(F=150.602，P＜0.001)和時(shí)間效應(yīng)(F=97.706，P＜0.001)以及分組與時(shí)間的交互效應(yīng)(F=4.125，P=0.001)，說(shuō)明分組因素和時(shí)間因素對(duì)各組動(dòng)物空間學(xué)習(xí)記憶能力有影響，組間差異大小在不同時(shí)間點(diǎn)不一樣。進(jìn)一步用單因素方差分析(one-wayANOVA)對(duì)每一個(gè)時(shí)間點(diǎn)各組動(dòng)物在的認(rèn)知功能進(jìn)行組間的多重比較。發(fā)現(xiàn)從移植術(shù)后第25天開(kāi)始兩個(gè)細(xì)胞移植組每天測(cè)得的逃避潛伏期明

23、顯比Matrigel組短（P＜0.05），說(shuō)明移植術(shù)后第25天開(kāi)始細(xì)胞移植組的空間學(xué)習(xí)記憶能力強(qiáng)于Matrigel組。兩個(gè)細(xì)胞移植組之間相比較，在細(xì)胞移植后第27天開(kāi)始，HUMSCs組每天測(cè)得逃避潛伏期比HUMSC-NSs組短(P＜0.001)，表明隨著時(shí)間的推延，HUMSCs組大鼠的空間學(xué)習(xí)記憶能力恢復(fù)得更好。
　　 組織修復(fù)情況:腦組織大體形態(tài)學(xué)觀察顯示除假手術(shù)組腦組織中幾乎沒(méi)有缺損灶外，另外三個(gè)組腦組織均存在不同程度的缺損

24、灶。兩個(gè)細(xì)胞移植組缺損灶較Matrigel組小。相對(duì)而言，HUMSCs組的腦組織缺損灶似乎比HUMSC-NSs組小。進(jìn)一步用Cavalieri法測(cè)量計(jì)算空洞體積百分率，我們發(fā)現(xiàn)假手術(shù)組、Matrigel組、HUMSCs組和HUMSC-NSs組的空洞體積百分率分別為:0.64±0.10％、11.38±0.67％、5.49±0.58％和8.15±0.47％。方差分析結(jié)果顯示F值=2.570，P值=0.083?？烧J(rèn)為各組老鼠腦組織空洞體積百分

25、率存在顯著差異。用LSD法進(jìn)行兩兩比較，發(fā)現(xiàn)3個(gè)腦損傷組腦組織空洞體積百分率都顯著大于假手術(shù)組(P值＜0.001）。HUMSCs組和HUMSC-NSs組的空洞體積百分率都顯著小于Matrigel組空洞體積百分率（P值＜0.001）。而且，HUMSCs組和HUMSC-NSs組的空洞體積百分率之間比較亦有顯著性差異（P值＜0.05）。
　　 免疫排斥情況:無(wú)論是HUMSCs還是HUMSC-NSs植入大鼠體內(nèi)28天后都沒(méi)有表現(xiàn)出任何明

26、顯地免疫排斥反應(yīng)現(xiàn)象，如炎細(xì)胞浸潤(rùn)，血管套形成等。組織切片用CD4(T輔助細(xì)胞表面標(biāo)記物)、CD8（T殺傷細(xì)胞表面標(biāo)記物）、CD11b（巨噬細(xì)胞表面標(biāo)記物）和MPO（白細(xì)胞表面標(biāo)記物）等抗體進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示:組織切片中以上抗體的免疫反應(yīng)幾乎都可以忽略不計(jì)。進(jìn)一步說(shuō)明HUMSCs和HUMSC-NSs植入體內(nèi)后不會(huì)引起免疫排斥反應(yīng)。
　　 移植細(xì)胞分化情況:細(xì)胞移植28天后，HUMSCs組和HUMSC-NSs組海馬內(nèi)仍有DiI陽(yáng)性

27、HUMSCs或HUMSC-NSs存在。大部分HUMSCs或HUMSC-NSs位于病變周?chē)拷＝M織，也有一些移植細(xì)胞向損傷病灶中心遷移。免疫組織化學(xué)染色后計(jì)數(shù)并計(jì)算HUMSCs組和HUMSC-NSs組中DiI/β-tubulinⅢ，DiI/GalC，DiI/GFAP，DiI/MAP2ab雙陽(yáng)性細(xì)胞占DiI陽(yáng)性細(xì)胞得比例。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在HUMSCs組DiI/β-tubulinⅢ，DiI/GalC，DiI/GFAP和DiI/MAP2ab雙陽(yáng)

28、性細(xì)胞占DiI陽(yáng)性細(xì)胞得比例分別為:5.71±0.52％，3.61±0.41％，5.62±0.60％和3.39±0.23％。而在HUMSC-NSs組DiI/β-tubulinⅢ，DiI/GalC，DiI/GFAP和DiI/MAP2ab雙陽(yáng)性細(xì)胞占DiI陽(yáng)性細(xì)胞得比例分別為:6.90±0.66％，4.01±0.43％，6.51±0.70％和3.12±0.28％。統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示HUMSCs組和HUMSC-NSs組的分化結(jié)果沒(méi)有統(tǒng)計(jì)差異:DiI

29、/β-tubulinⅢ(t=-1.418,P=0.178),DiI/GalC(t=-0.674,P=0.512),DiI/GFAP(t=-0.967，P=0.350)和DiI/MAP2ab(t=0.761，P=0.459)。說(shuō)明無(wú)論是HUMSCs還是HUMSC-NSs在植入體內(nèi)后，絕大大部分都沒(méi)有向神經(jīng)外胚層細(xì)胞分化，二者分化結(jié)果無(wú)統(tǒng)計(jì)差異。
　　 各組海馬提取液中BDNF和NT-3蛋白水平檢測(cè)結(jié)果:在假手術(shù)組、Matrigel

30、組、HUMSCs組和HUMSC-NSs組中的BDNF水平分別為:59.07±6.06pg/ml，130.80±10.40pg/ml，269.40±14.00pg/ml，190.47±15.24pg/ml。而相對(duì)應(yīng)的各組NT-3蛋白水平分別為:23.54±3.38pg/ml，48.96±4.74pg/ml，128.97±13.46pg/ml和78.55±7.81pg/ml。方差分析顯示各組的BDNF（F值=67.754，P值＜0.001）

31、，和NT-3（F值=30.003，P值＜0.001）蛋白水平存在顯著差異。用DunnttT3檢驗(yàn)進(jìn)行多重比較。結(jié)果顯示與假手術(shù)組相比，三個(gè)海馬損傷組中的BDNF水平均顯著增高（P值＜0.001）。而且，HUMSCs組和HUMSC-NSs組中的BDNF水平也顯著高于Matrigel組(HUMSCs組與Matrigelgroup相比P值＜0.001;HUMSC-NSs組與Matrigelgroup相比，P值=0.025)。HUMSCs組和H

32、UMSC-NSs組的BDNF水平之間也存在顯著差異(P值=0.007)。有趣地是各實(shí)驗(yàn)組海馬提取液中的NT-3蛋白水平的表現(xiàn)模式與BDNF相似。與假手術(shù)組比較，Matrigel組(P值=0.002)、HUMSCs組（P值＜0.001）和HUMSC-NSs組（P值＜0.001）中的NT-3蛋白水平都顯著增高。而且，HUMSCs組(P值＜0.001）和HUMSC-NSs組(P值=0.026)中的NT-3蛋白水平較Matrigel組顯著增高。

33、HUMSCs組和HUMSC-NSs組的NT-3蛋白水平之間亦存在顯著差異(P值=0.026)。
　　 結(jié)論:轉(zhuǎn)分化的HUMSCs和未轉(zhuǎn)分化的HUMSCs對(duì)TBI后的認(rèn)知功能恢復(fù)都有促進(jìn)作用，但是未轉(zhuǎn)分化的HUMSCs效果更好，而且轉(zhuǎn)分化后HUMSCs分泌神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的能力顯著降低，所以移植前的轉(zhuǎn)分化可能不是必需的。同時(shí)，絕大多數(shù)植入細(xì)胞在體內(nèi)未分化為神經(jīng)樣細(xì)胞，說(shuō)明體外的轉(zhuǎn)分化難以在體內(nèi)實(shí)現(xiàn)，這也提示細(xì)胞替代作用不大可能是TBI